[发明专利]一种嵌合抗原受体巨噬细胞及其制备方法和用途有效

申请号：	202110485244.3	申请日：	2021-04-30
公开（公告）号：	CN113214408B	公开（公告）日：	2022-12-27
发明（设计）人：	黄来强;邓婷;代小勇	申请（专利权）人：	清华大学深圳国际研究生院
主分类号：	C07K19/00	分类号：	C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00
代理公司：	北京市诚辉律师事务所 11430	代理人：	范盈;李玉娜
地址：	518055 广东省深圳市***	国省代码：	广东;44
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摘要：
搜索关键词：	一种嵌合抗原受体巨噬细胞及其制备方法用途
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【权利要求书】：

1.一种靶向CD133且诱导巨噬细胞的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体从N端到C端依次由抗CD133的单链可变区、CD8信号肽、CD8铰链区、CD8跨膜区和FCGR1A胞内区连接而成，其中，FCGR1A胞内区氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：RKELKRKKKWDLEISLDSGHEKKVISSLQEDRHLEEELKCQEQKEEQLQEGVHRKEPQGATSEQ ID NO.1；

抗CD133的单链可变区scfv为由SEQ ID NO.3所示基因编码的氨基酸序列；CD8铰链区为由SEQ ID NO.4所示基因编码的氨基酸序列；CD8跨膜区为由SEQ ID NO.5所示基因编码的氨基酸序列；CD8信号肽为由如SEQ ID NO.6所示基因编码的氨基酸序列。

2.一种编码基因，其特征在于，所述编码基因编码如权利要求1所述的嵌合抗原受体。

3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于，所述编码基因中编码FCGR1A胞内区序列的片段如SEQ ID NO.2所示:

CGTAAAGAACTGAAAAGAAAGAAAAAGTGGGATTTAGAAATCTCTTTGGATTCTGGTCATGAGAAGAAGGTAATTTCCAGCCTTCAAGAAGACAGACATTTAGAAGAAGAGCTGAAATGTCAGGAACAAAAAGAAGAACAGCTGCAGGAAGGGGTGCACCGGAAGGAGCCCCAGGGGGCCACGTAG SEQ ID NO.2。

4.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体为包括如权利要求2或3所述的编码基因的病毒载体。

5.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述病毒载体为慢病毒载体、逆转录病毒载体或腺相关病毒载体中的任意一种。

6.一种重组慢病毒，其特征在于，所述重组慢病毒由权利要求4或5所述的表达载体和哺乳细胞制备得到。

7.一种嵌合抗原受体巨噬细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体巨噬细胞表达如权利要求1所述的嵌合抗原受体。

8.根据权利要求7所述的嵌合抗原受体巨噬细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体巨噬细胞的基因组中整合有如权利要求2或3所述的编码基因。

9.根据权利要求7所述的嵌合抗原受体巨噬细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体巨噬细胞包括如权利要求4或5所述的表达载体、和/或如权利要求6所述的重组慢病毒。

10.如权利要求1所述的嵌合抗原受体、如权利要求2或3所述的编码基因、如权利要求4或5所述的表达载体、如权利要求6所述的重组慢病毒或如权利要求7-9任一项所述的嵌合抗原受体巨噬细胞在制备治疗肿瘤的药物中的应用；所述肿瘤为高表达CD133结直肠癌。

11.权利要求4或5所述表达载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S11).依次连接抗CD133的单链可变区、CD8信号肽、CD8铰链区、CD8跨膜区和FCGR1A胞内区的基因片段；

S12).将步骤S11)中得到的基因片段连接至载体中，得到能抗CD133靶点的表达载体；

其中，FCGR1A胞内区基因片段序列如SEQ ID NO.2所示：

12.权利要求7-9任一项所述嵌合抗原受体巨噬细胞的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括将权利要求2或3所述的编码基因，或权利要求4或5所述的表达载体，或权利要求6所述的重组慢病毒导入巨噬细胞的步骤。