[发明专利]一种嵌合抗原受体巨噬细胞及其制备方法和用途

说明书

本发明涉及一种嵌合抗原受体巨噬细胞及其制备方法和用途，具体公开了一种靶向CD133且诱导巨噬细胞的嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括抗CD133的轻链、抗CD133的重链、CD8铰链区、CD8跨膜区和胞内区、FCGR1A胞内区，其中，FCGR1A胞内区序列如SEQ ID NO.1所示。还公开了一种嵌合抗原受体巨噬细胞，所述嵌合抗原受体巨噬细胞表达如前所述的嵌合抗原受体。该嵌合抗原受体巨噬细胞对结直肠癌细胞具有显著的吞噬杀伤作用，可用于制备治疗结直肠癌药物。

技术领域

本发明属于免疫学和分子生物学领域，具体而言，涉及一种嵌合抗原受体巨噬细胞及其制备方法和用途。

背景技术

结直肠癌作为最常见的恶行肿瘤之一，每年占据了癌症确诊率的10％。根据流行病学报告表明，结直肠癌的死亡率位列第四，位于肺癌、肝癌和胃癌之后。从1990年到2017年，全球结直肠癌的年龄标准化发病率增加了9.5％，而结直肠癌筛查措施的引入却使得死亡率下降了13.5％。但是中国的结直肠癌发病率和死亡率增幅都明显高于世界平均水平，中国结直肠癌发病数分别为10.7万和43.2万，发病率升高了84.1％。中国结直肠癌死亡数分别7.6万和18.7万，死亡率升高了8.2％，而结直肠癌已经增长为中国的第三大癌症。

目前结直肠癌的病因尚未完全明确，但是伴随着医学及分子生物学的不断发展及研究的日益深入，结直肠癌的病变过程可归纳为三种,其中染色体不稳定是主要的病变类型，基因APC的突变引起RAS激活和TP53丢失造成结直肠癌的形成。遗传和环境因素对结直肠癌的发生均具有重要的影响。日常生活中吸烟、饮酒过量，体重增加，以及红类和加工肉类的摄入会加速结直肠癌的发生。

结直肠癌的治疗方法主要以内镜治疗、外科手术、放射疗法、化学疗法等为主，其中外科手术为结直肠癌治疗的基础和主要手段。但是仅适用于早期阶段，对于中晚期患者，手术治疗效果不佳。所以其他新兴的治疗方式：靶向治疗、基因治疗、新辅助化疗、免疫治疗等治疗手段也越来越多的被应用。分子靶向药物治疗在特定患者中疗效显著，患者生存获益。但靶向药物的应用存在局限性，主要因为目前靶向药物的有效的靶点还较少，同时在选择适宜的靶向治疗药物前，需要对患者进行相应的分子靶点检测。目前针对CRC患者，主要的两种靶向药物是以血管内皮生长因子(VEGF)为靶点的贝伐珠单抗和以表皮生长因子受体(EGFR)为靶点的西妥昔单抗。国内学者研究提示，进展期及晚期结直肠癌患者使用西妥昔单抗和贝伐珠单抗生存获益。

肿瘤干细胞(cancer stem cells，CSCs)是在肿瘤组织中存在一群具有自我更新且无限增殖，能够促进维持肿瘤生长的具有与正常组织干细胞相似功能的细胞，而且肿瘤干细胞具有多分化潜能，可以分化产生不同的组织细胞。其来源目前尚无定论，目前主要有两种观点；一种观点认为肿瘤干细胞来源于机体内原有的正常干细胞突变产生；另一种观点认为肿瘤干细胞是祖细胞基因突变突变而形成肿瘤干细胞。此外有部分学者提出肿瘤干细胞可能是骨髓来源的干细胞突变产生。目前研究已从结在卵巢癌、胰腺癌、脑肿瘤和直肠癌等肿瘤组织中分离出肿瘤干细胞。CD133又称Prominin-1，含5个跨膜区和2个胞外区的糖蛋白，是Prominin家族中的一员，最初作为造血干/祖细胞的标志物。2006年O，Brien等人首次从结直肠癌标本中分离出CD133+肿瘤细胞，并发现CD133+具有成瘤能力，而提出CD133可能为结直肠癌肿瘤干细胞。随后Cherciu等人研究提示CD44、CD133、0et4、ALDHl、CDl66、CD24等可能是结直肠癌肿瘤标干细胞标记物。伴随着对结直肠癌肿瘤干细胞标记物的研究报道增多，目前CD44/CD133是常用的结直肠癌肿瘤干细胞的标志物，并且CD44/CD133的高表达是影响患者预后的危险因素。