[发明专利]一种高效的从河豚内脏提取和分离制备高纯度河豚毒素的方法

权利要求书

1.一种高效的从河豚鱼内脏提取和分离制备河豚毒素的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将新鲜的河豚卵巢15千克用清水漂洗和除杂后，用绞肉机搅碎，加入河豚卵巢重量的2-3倍酸性（1%醋酸）无水乙醇和0.6倍的硅藻土搅拌均匀，均匀装入ø200 x 1500 mm 的层析柱中，静置1小时后，用酸性乙醇洗脱，直至层析洗脱液中无TTX为止，收集层析洗脱液即为TTX提取液，得含TTX 1236.0 mg的提取液，TTX提取率96%；

（2）将TTX提取液减压浓缩至水相，回收的乙醇可重复使用，浓缩液用1/2-1/10体积的醋酸乙酯萃取除去低极性杂质得TTX提取浓缩液，得含TTX 1168mg的提取浓缩液，TTX回收率90.5%；

（3）将15千克河豚卵巢提取浓缩液用D-152弱酸性阳离子交换树脂柱层析（ø100 x1000 mm）分离，上样后先后用0.2%磷酸铵溶液、纯水和0.5%醋酸水各洗脱3BV，洗去杂质，然后用2%醋酸水溶液洗脱至无TTX，TTX的回收率为93.6%，收集TTX集中段，用纳滤浓缩至小体积，减压浓缩干，得TTX粗品，TTX的回收率为90.4%，TTX含量低的洗脱相再用D-152弱酸性阳离子交换树脂柱层析浓缩回收TTX；

（4）TTX粗品用碱性乙醇和碱性水洗脱3次，沉淀酸溶碱沉3次，得纯化的TTX，TTX的回收率为80.7%；

（5）纯化的TTX用HPLC分析和测定含量，得TTX 815.6 mg，HPLC分析，TTX纯度≥98%，TTX的总回收率为63.3%。