[发明专利]一种同时检测猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型病毒的试剂盒及应用

权利要求书

1.一种可同时快速检测猪圆环病毒2型和3型病毒的实时荧光RAA引物探针组，其特征在于，所述引物序列如SEQ ID NO.1-2和4-5所示，所述探针序列如SEQ ID NO.3和6所示；所述SEQ ID NO.3修饰如下：(1)第35个碱基修饰BHQ1-dT；(2)第33位碱基修饰6-FAM-dT；(3)第34位碱基替换为dSpacer；(4)3'端修饰C3 Spacer；

所述SEQ ID NO.6修饰如下：(1)第33位碱基修饰BHQ1-dT；(2)第29位碱基修饰HEX-dT；(3)第31位碱基替换为dSpacer；(4)3'端修饰C3 Spacer；

所述引物和探针的浓度比为2:1。

2.权利要求1所述的实时荧光RAA引物探针组，其特征在于：所述引物浓度为每条引物浓度为10μmol/L，所述探针浓度为每条探针浓度为5μmol/L。

3.一种组合物，其特征在于，包含权利要求1或2所述的实时荧光RAA引物探针组。

4.一种可同时快速检测猪圆环病毒2型和3型病毒的检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求1或2所述荧光RAA引物探针组。

5.权利要求1或2所述荧光RAA引物探针组在制备用于同时检测猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型病毒的制剂中的用途。

6.权利要求5所述的用途，其特征在于，所述检测包括：

(1)提取待测样本DNA；

(2)以所述DNA为模板，使用权利要求1或2所述引物探针组进行双重实时荧光RAA检测，其中引物和探针的浓度比为2:1，扩增反应15-20min；每条引物浓度为10μmol/L，每条探针浓度5μmol/L，扩增反应15min；反应过程中实时检测FAM和HEX的荧光信号。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，结果判断如下：

(a)若在RAA扩增的15min内，FAM荧光信号值超过阈值且出现拐点，而HEX荧光信号未超过阈值或未出现拐点，则表明扩增结果为猪圆环病毒2型阳性，猪圆环病毒3型病毒阴性；

(b)若在RAA扩增的15min内，HEX荧光信号值超过阈值且出现拐点，而FAM荧光信号值未超过阈值或未出现拐点，则表明扩增结果为猪圆环病毒3型病毒阳性，猪圆环病毒2型阴性；

(c)若在RAA扩增的15min内，FAM和HEX荧光信号值均超过阈值且出现拐点，则表明扩增结果为猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型病毒双阳性；

(d)若在RAA扩增的15min内，FAM和HEX荧光信号值均未超过阈值或未出现拐点，则表明扩增结果为猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型病毒双阴性。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，使用Thermo病毒核酸抽提试剂盒对所述待测样本提取DNA；使用等温扩增仪T16-ISO自带的软件Desktop对扩增结果进行分析。