[发明专利]一种脐带血干细胞及其扩增培养方法有效
| 申请号： | 202110493032.X | 申请日： | 2021-05-07 |
| 公开（公告）号： | CN113174370B | 公开（公告）日： | 2021-10-15 |
| 发明（设计）人： | 顾军;兰丹;黄力越;顾帅 | 申请（专利权）人： | 多能干细胞再生医学科技（广州）有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0789 | 分类号： | C12N5/0789 |
| 代理公司： | 广州博士科创知识产权代理有限公司 44663 | 代理人： | 宋佳 |
| 地址： | 510000 广东省广州市番禺区小谷*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 脐带血 干细胞 及其 扩增 培养 方法 | ||
1.一种脐带血干细胞扩增培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1，向脐带血中加入聚乙二醇溶液，混匀，离心，弃去上清液，得混合液A；
S2，向所述混合液A中加入培养液垂悬，移入培养皿中，加入酯化酶，静置培养，得凝胶块；
S3，分割所述凝胶块，得多个小凝胶块；
S4，向所述小凝胶块中补充培养液，使用组织块法培养，待凝胶块细胞迁出后，胰酶消化，收集细胞，添加冷冻液冻存，即得脐带血干细胞，
其中，所述聚乙二醇溶液的配置方法包括如下步骤：
称取聚乙二醇，灭菌20min，加入预热的细胞培养基DMEM中，使所述聚乙二醇溶解，调整溶液pH为6-7.3。
2.根据权利要求1所述的脐带血干细胞扩增培养方法，其特征在于，还包括如下步骤：
S5，回收所述小凝胶块，重复步骤S4。
3.根据权利要求1所述的脐带血干细胞扩增培养方法，其特征在于，
其中，所述聚乙二醇的分子量为1200 kDa -22000kDa。
4.根据权利要求1所述的脐带血干细胞扩增培养方法，其特征在于，
其中，所述聚乙二醇的质量分数为1.6%~43%。
5.根据权利要求1所述的脐带血干细胞扩增培养方法，其特征在于，
其中，所述酯化酶为红曲霉酯化酶、根霉酯化酶或酯化酶SOAT1中的任意一种或多种。
6.根据权利要求1所述的脐带血干细胞扩增培养方法，其特征在于，
其中，所述培养液为完全培养液。
7.根据权利要求1所述的脐带血干细胞扩增培养方法，其特征在于，
其中，所述组织块法包括如下步骤：
向所述小凝胶块加入血清和/或基质胶，混匀后，逐块铺展，铺展后，竖起培养皿，弃去血清和/或基质胶，置于培养箱中，静置2-8h，向每个所述小凝胶块滴加10-120μL培养液，置于培养箱中，8-14h后根据培养皿大小添加适量的培养液。
8.根据权利要求1所述的脐带血干细胞扩增培养方法，其特征在于，
其中，所述小凝胶块的体积为1 mm3-1000mm3。
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