[发明专利]一种脐带血干细胞及其扩增培养方法

说明书

本发明涉及生物医药与细胞工程技术领域，具体涉及一种脐带血干细胞及其扩增方法。本发明提供的脐带血干细胞扩增培养方法，包括如下步骤：向脐带血中加入聚乙二醇溶液，混匀，离心，弃去上清液，得混合液A；向混合液A中加入培养液垂悬，移入培养皿中，加入酯化酶，静置培养，得凝胶块；分割凝胶块，得多个小凝胶块；向小凝胶块中补充培养液，使用组织块法培养，待凝胶块细胞迁出后，胰酶消化，收集细胞，添加冷冻液冻存，即得。该方法可以体外重建脐带血干细胞壁龛，提高脐带血干细胞的活性和干性，具有很好的临床使用前景。

技术领域

本发明涉及生物医药与细胞工程技术领域，具体涉及一种脐带血干细胞及其扩增方法。

背景技术

脐带血干细胞已有30余年的临床治疗历史，目前已应用于80多种临床疾病的治疗。按照有关管理规范，移植的有核细胞应≥3×10⁷个/kg，脐带血冻存前的有核细胞应≥8×10⁸个才有可能用于临床移植。然而脐带血中包含的干细胞数量有限，且体外扩增时干细胞易发生分化，大大降低了移植的效果。亟需新的脐带血干细胞的体外扩增培养方法。

在现有技术中，专利201510277206.3对脐带血细胞进行筛选后，使用添加生长因子的培养液进行扩增。但全程需要添加大量的生长因子，成本较高。同时添加的生长因子与脐带血干细胞在体内微环境中的生长因子不同，脐带血干细胞在扩增过程中为适应人为的体外环境会发生各种功能变化。

专利201911106991.0制备了改性醋酸纤维中空纤维膜装置，为脐带血干细胞提供了三维的生长环境。使用无血清培养基，并添加β-谷甾醇、儿茶素和人重组生长因子等促进人脐带间充质干细胞的增殖和干细胞维持。但依然存在专利201510277206.3相同的问题。

此外，上述方法从获取的干细胞到实现体外增殖的过程中，干细胞已通过调整自身信号通路适应人为的体外环境，其细胞的功能已与体内不同。

事实上，干细胞在生物体内通过干细胞壁龛维持其细胞干性，所述的干细胞壁龛包括支持细胞、生长因子、糖胺聚糖(提供黏附位点、信号交流等)、营养物质、代谢产物(反向调控干细胞的功能)。上述方法仅模拟了部分脐带血干细胞的壁龛微环境。在已有的体外细胞培养方法中，组织块法可以较好的在体外保留细胞的壁龛微环境，但脐带血干细胞存在于血液中，现有的技术不能进行组织块法培养。

发明内容

由于现有技术中存在上述不足，本发明提供了一种脐带血干细胞及其分离扩增方法，从而可以实现重建脐带血干细胞壁龛微环境，用于分离和扩增脐带血干细胞。

具体地，本发明的技术方案如下：

一种脐带血干细胞扩增培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1，向脐带血中加入聚乙二醇溶液，混匀，离心，弃去上清液，得混合液A；

S2，向混合液A中加入培养液垂悬，移入培养皿中，加入酯化酶，静置培养，得凝胶块；

S3，分割凝胶块，得多个小凝胶块；

S4，向小凝胶块中补充培养液，使用组织块法培养，待凝胶块细胞迁出后，胰酶消化，收集细胞，添加冷冻液冻存，即得脐带血干细胞。

优选地，上述脐带血干细胞扩增培养方法还包括如下步骤：

S5，回收小凝胶块，重复步骤S4，直至收集的脐带血干细胞的数量到达目标数量。

优选地，上述脐带血干细胞扩增培养方法还包括采血步骤：在脐静脉穿刺后，使用含抗凝剂的采集袋收集，并使用含抗凝剂的生理盐水进一步冲洗脐静脉，从而采集更多脐带血。

优选地，聚乙二醇溶液的配置方法包括如下步骤：