[发明专利]一种酶解桑叶蛋白制备ACE抑制肽的方法

说明书

本发明公开一种酶解桑叶蛋白制备ACE抑制肽的方法，属于功能材料技术领域。本发明取新鲜桑叶干燥粉碎成桑叶粉，经超声波提取，离心分离得沉淀蛋白；再将沉淀蛋白经过酶解、离心分离等步骤后到成品ACE抑制肽。在本发明所述酶解工艺下，桑叶蛋白水解度为29.05％，酶解液ACE抑制率达到82.46％且制备工艺简单，操作方便，成本低廉，具有广阔的市场价值。

技术领域

本发明属于功能材料技术领域，具体涉及一种酶解桑叶蛋白制备ACE抑制肽的方法。

背景技术

血管紧张素转化酶(Angiotensin I—convening enzyme，ACE)是导致血压升高的主因之一。ACE可使Angiotensin I(血管紧张素I，Ang I)转化为Angiotensin II(血管紧张素II，Ang II)，同时通过降解或抑制具有降压作用的缓激肽而导致血压上升。目前，临床常用的ACE抑制剂大多为合成药物，例如卡托普利、阿拉普利、缬沙坦等，均具有ACE抑制作用，但长期服用会对患者产生副作用。ACE抑制肽又称降压肽，是一类能够使血管紧张素转化酶活性受抑制的多肽，大多源自动物、植物、微生物等食源性天然蛋白，临床应用无不良反应，更为安全，是ACE抑制剂研究的新热点。近年来，已有研究利用麦胚、大豆、米渣等多种原料，选用酶解、发酵等方法制备ACE抑制肽，并对其进行分离纯化、结构分析以及功能性评价。由于不同种类蛋白酶的酶切位点不同，所产生肽段的功能性和活性也存在差异，由此针对不同蛋白底物选取合适的酶，对于制备高活性的ACE抑制肽具有重要的意义。

我国是蚕桑业资源非常丰富，桑叶纤维含量低，蛋白含量高，是理想的蛋白源之一。因此，从桑叶蛋白中提取ACE抑制肽具有极大的发展潜力。目前对桑叶蛋白ACE抑制肽的研究较少，如何以桑叶蛋白为原料成功制备出稳定性好活性高的ACE抑制肽是目前亟待解决的技术问题。

发明内容

为实现上述技术目的，本发明所采用的技术方案为：

一种酶解桑叶蛋白制备ACE抑制肽的方法，包括以下步骤：

(1)取新鲜桑叶干燥粉碎成桑叶粉，按照料液比1:20加入蒸馏水混合均匀，进行超声波提取，得混悬液；

(2)混悬液离心分离，得上清液；上清液加入HCl调节pH至3.5，再次离心分离得沉淀蛋白；

(3)将沉淀蛋白重新悬浮于蒸馏水中，调节pH至7.0，再次离心分离，得沉淀，冷冻干燥后得桑叶蛋白粉，于-20℃下贮存备用；

(4)取桑叶蛋白粉，加入蒸馏水配置成酶解底物，混合均匀，根据不同酶的最适酶解条件选择水浴温度和pH值(水浴恒温37-60℃，pH值2-8)，再加入酶解底物质量7.5％的酶，酶解90min；酶解完成后，立即置于沸水中灭酶，灭酶后冷却得酶解液；冷却使用流动水快速冷却；

(5)将酶解液离心分离后，得上清液，即为ACE抑制肽。

进一步的，步骤(1)中超声波功率为400W，超声时间为40min。

进一步的，步骤(2)离心分离的时间为6min，转速为5000r/min；HCl的浓度为1.0mol/L。

进一步的，步骤(4)酶解底物浓度为20g/L。

进一步的，步骤(4)调节pH使用0.5mol/L的NaOH或0.5mol/L的HCl。

进一步的，步骤(4)所加入的酶为木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、芽孢杆菌蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶中的一种或几种。

更进一步的，步骤(4)所加入的酶为芽孢杆菌蛋白酶。

进一步的，步骤(5)沸水灭酶时间为10min。

进一步的，步骤(6)离心分离的转速为10000r/min，离心时间为10min，温度控制在4℃。