[发明专利]一种靶向APJ的抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种靶向APJ的抗体及其制备方法和应用。所述的抗体包含VH和VL，所述VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，其序列见本发明。本发明所提供的抗体能够与人和猴APJ抗原结合，具有高亲和力及高结合特异性，并能够有效抑制APJ‑Apelin信号通路。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种靶向APJ的抗体及其制备方法和应用。

背景技术

APJ是一个G蛋白偶联受体，在内皮细胞、肌细胞、海马体、结肠、胰腺、骨组织均有表达，通过与其配体Apelin-13结合，启动Gi/o信号通路，从而在心血管系统发挥作用；另外，在癌症组织中，发现APJ及其配体Apelin表达上调，比如胃癌及胃癌细胞、胶质母细胞瘤、肺小细胞肺癌等，APJ-Apelin信号通路可能会诱导瘤内淋巴管生成和促进肿瘤的淋巴转移，有动物实验表明，apelin会促进小鼠胆管癌血管生成和癌细胞增殖，在静脉注射APJ小分子抑制剂后，会抑制肿瘤生长。与小分子药物相比，抗体类的大分子药物具有特异性好、安全性高、代谢慢等诸多优势，因此开发可用于治疗癌症的APJ抗体药物有显著的优势。

杂交瘤技术是制备高亲和力抗体的经典方法，目前上市的抗体药物大部分是通过杂交瘤技术获得的。该技术涉及到多个环节，包括制备免疫原、动物免疫、浆B细胞的融合、杂交瘤上清的筛选等，每个环节对于获得高质量的抗体都较为重要，特别是动物免疫部分。目前适合作为抗体药物的靶点众多，但是并非都可以获得具有治疗活性的抗体，比如离子通道、GPCR等多次跨膜蛋白，由于这些靶点暴露在胞外的区域有限、难以获得高纯度的蛋白、有些功能性表位的氨基酸序列人和免疫动物的同源性较高等原因，导致针对这些靶点的抗体发现很有挑战性。

APJ是一个具有377个氨基酸、7次跨膜域的G蛋白偶联受体，人和小鼠的氨基酸序列同源性较高，作为多次跨膜蛋白，暴露在胞外区的氨基酸序列较短，无法制备纯度和产量较高的重组蛋白，蛋白可在哺乳动物表达并且定位于脂膜，但是表达量有限，因此很难在小鼠体内引起较强的免疫反应，从而获得高亲和力和具备生物学活性的抗体，且难以有效抑制Apelin通路活性。CN110655577A公开了一种APJ单克隆抗体，并将其与Elabala融合施用。而现有技术中仍然缺乏对于APJ抗原结合活性更高，并能够抑制Apelin通路的高效抗体。

因此急需一种能够用于抑制APJ/Apelin信号通路，且对APJ抗原结合活性更高的靶向APJ抗体。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为克服现有技术中缺乏高效且能抑制Apelin通路的APJ抗体的缺陷，提供一种靶向APJ的抗体及其制备方法和应用。

为解决上述问题，本发明提供的技术方案之一为：一种靶向APJ的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3；

其中，所述HCDR1含有如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:10所示的序列或其变体1，所述HCDR2含有如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11所示的序列或其变体2，所述HCDR3含有如SEQ IDNO:4或SEQ ID NO:12所示的序列；所述LCDR1含有如SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:14所示的序列或其变体3，所述LCDR2含有如SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:15所示的序列或其变体4，所述LCDR3含有如SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:16所示的序列或其变体5。

本发明所述变体1较佳地为对SEQ ID NO:10所示序列的第1或4位进行替换后获得；其中，第1位优选替换为A，第4位优选替换为F；更佳地，所述变体1的序列如SEQ ID NO:20所示。