[发明专利]一种利用猪去氧胆酸制备熊去氧胆酸的方法

权利要求书

1.一种利用猪去氧胆酸制备熊去氧胆酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）猪去氧胆酸与琼斯试剂发生氧化反应，分离纯化获得中间体R1：

；

（2）在氧气，3α-羟基类固醇脱氢酶、7β-羟化酶和葡萄糖脱氢酶催化，葡萄糖和辅酶I或辅酶II的参与下将中间体R1催化，反应终止后分离纯化获得中间体R2：

；

（3）中间体R2通过黄鸣龙反应分离纯化后获得熊去氧胆酸：

。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，中间体R1：3α-羟基类固醇脱氢酶：7β-羟化酶：葡萄糖脱氢酶：辅酶：葡萄糖的质量比为1：(0.3-1)：(0.2-1)：(0.1-1)：(0.001-0.005)：(2-4)。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述反应在溶液中进行，所述溶液的溶剂为乙酸乙酯或丙酮。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述分离纯化步骤为：用硅藻土过滤，减压浓缩去除溶剂。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，辅酶I和辅酶II为还原态。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，反应在缓冲溶液中进行；中间体R1在溶液中的质量体积浓度为5%-15%。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，反应pH为6.5-7.5，反应温度为25℃-37℃。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，氧气由空气或富氧空气提供；所述富氧空气的氧气含量为21%-50%；通气量为0.5-2vvm。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述分离纯化步骤为：反应体系中加入等体积乙酸乙酯，质量体积浓度为20%的硅藻土，搅拌后过滤，将滤液分液后收集有机相I；将滤饼和水相合并，再加入首次加入量的乙酸乙酯，搅拌后过滤，将滤液分液，收集有机相II，然后将两次有机相合并后去除溶剂获得中间体R2。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述分离纯化步骤为：反应体系中加等体积水，然后调pH至2.0，然后用2倍体积的乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液后蒸出溶剂获得产物。