[发明专利]一种利用猪去氧胆酸制备熊去氧胆酸的方法

说明书

本发明提供了一种利用猪去氧胆酸制备熊去氧胆酸的方法，首先利用化学法将猪去氧胆酸3,6‑羟基氧化成3,6‑酮基；第二步利用3α‑类固醇脱氢酶将3‑酮基还原成3α‑羟基，同时利用7β‑羟化酶将底物加羟基生成7‑羟基；最后利用化学法去掉6‑酮基生成UDCA。此化学‑酶法工艺简单，反应条件温和，环境友好，反应底物浓度高，辅酶可再生，极大降低了生产成本和环保压力，化学‑酶法制备UDCA提供了一种环保、经济、高效的新思路。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及熊去氧胆酸的制备方法，具体涉及一种从猪去氧胆酸合成熊去氧胆酸的方法。

背景技术

熊去氧胆酸(Ursodexycholic acid)简称UDCA，是熊胆的主要成分，其化学名称为(3α，7β)-二羟基-5β胆烷酸。医学上用于增加胆汁酸分泌，并使胆汁成分改变，降低胆汁中胆固醇及胆固醇脂，有利于胆结石中的胆固醇逐渐溶解，用于治疗胆结石、胆汁淤积性肝病、脂肪肝、各型肝炎、中毒性肝障碍、胆囊炎、胆道炎和胆汁性消化不良、胆汁返流性胃炎、眼部疾病等。自从20世纪80年代，发现熊去氧胆酸具有有效溶解胆固醇性结石作用以来，不断有新的研究显示熊去氧胆酸在利胆、护肝中具有积极的作用。近年来，国外报道了UDCA还可用于治疗慢性肝炎和肝移植后排斥反应。随着临床研究的不断进步，人们发现熊去氧胆酸在促进免疫调节、治疗冠心病等方面也有积极作用。因此，随着研究的深入，熊去氧胆酸的药用价值越来越受到人们的重视，对熊去氧胆酸的需求量也在逐年升高。但是，天然熊胆的来源日益减少，人们一直在努力寻求除以天然熊胆获取熊去氧胆酸之外的替代方法。早期，熊去氧胆酸是通过从牛、羊胆汁中分离提取的胆酸为起始原料，然后经过复杂的化学方法生产的，其中，制成鹅去氧胆酸后需经氧化还原生成熊去氧胆酸。但是，这一方法步骤多、生产时间长、成本高。

近几年国内UDCA市场增长迅速，随着酶催化技术的逐步推进，目前的UDCA生产工艺开始从化学工艺大范围转到酶催化工艺。从目前公开的技术来看，酶法制备UDCA的原料大部分是鹅去氧胆酸（CDCA）。在各种动物胆汁中，猪胆汁是最常见且产量最大的，自古代开始就被广泛应用于临床，如用猪胆汁治疗急性黄疸型传染性肝炎、百日咳、急性肠炎以及胃溃疡等，均能收到良好的治疗效果。猪胆汁中主要含胆汁酸类、胆色素、粘蛋白、脂类及无机物等，胆汁酸则主要包含猪去氧胆酸（HDCA）、猪胆酸、鹅去氧胆酸、3α-羟基-6-氧-5α-胆烷酸以及胆石酸等，其中猪去氧胆酸约占40%。猪去氧胆酸的来源广泛廉价，成为较理想的原料。现有技术中从HDCA到UDCA的技术基本是全化学法，工艺复杂，成本较高，环境不友好，安全风险大，因此需要开发更加安全简便的生产途径。

发明内容

针对现有技术中的问题，本发明提供一种利用猪去氧胆酸制备熊去氧胆酸的方法，采用化学-酶法以猪去氧胆酸为原料，通过简单的三步反应，实现了UDCA的生产，该方法的工艺简单，成本低，转化率高，后处理更容易，更加环保。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

一种利用猪去氧胆酸制备熊去氧胆酸的方法，包括以下步骤：

（1）猪去氧胆酸与琼斯试剂发生氧化反应，分离纯化获得中间体R1：

；

（2）在3α-类固醇脱氢酶（3α-HSDH）、7β-羟化酶和葡萄糖脱氢酶（GDH）催化，葡萄糖和辅酶I或辅酶II的参与下将中间体R1催化，反应终止后分离纯化获得中间体R2：

；

（3）中间体R2通过黄鸣龙反应分离纯化后获得熊去氧胆酸：

。

优选地，步骤（1）中，所述反应在溶液中进行，所述溶液的溶剂为乙酸乙酯或丙酮。

优选地，步骤（1）中，所述分离纯化步骤为：用硅藻土过滤，减压浓缩去除溶剂。