[发明专利]一种梅毒特异抗体的检测探针及其制备方法

权利要求书

1.一种梅毒特异性抗体的检测探针，是将梅毒螺旋体三种抗原Tpp15, Tpp17, Tpp47通过(G₄S)₃柔性linker同噬菌体裂解酶 PlyV12 CBD分别融合，得到的蛋白Tpp15-(G₄S)₃-CBD，Tpp17-(G₄S)₃-CBD, Tpp47-(G₄S)₃-CBD同时标记在红色灭活的金葡菌载体的表面。

2.根据权利要求1所述的检测探针，其特征在于，所述金葡菌载体被四唑氯化物染料染至红色；所述四唑氯化物染料具体为5-氰基-2，3-二(4-甲基苯基)四唑氯化物。

3.权利要求1所述检测探针的制备方法，其特征在于，是将梅毒螺旋体抗原和噬菌体裂解酶CBD通过基因重组，构建表达质粒，在大肠杆菌表达系统进行蛋白表达，可溶蛋白纯化后同红色灭活的金葡菌载体共同孵育，得到检测梅毒特异抗体的探针。

4.权利要求3所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，将梅毒螺旋体抗原Tpp15, Tpp17, Tpp47通过(G₄S)₃柔性linker同噬菌体裂解酶PlyV12 CBD通过基因重组并在大肠杆菌中表达融合蛋白，获得蛋白Tpp15-(G₄S)₃-CBD、Tpp17-(G₄S)₃-CBD、Tpp47-(G₄S)₃-CBD，冷冻保存备用；

S2，将Tpp15-(G₄S)₃-CBD、Tpp17-(G₄S)₃-CBD、 Tpp47-(G₄S)₃-CBD标记在红色灭活的金黄色葡萄球菌载体上。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，S2中，具体步骤如下：

(1) 取红色灭活的1*10¹⁰Particle/ml金黄色葡萄球菌0.1M Tris-Cl悬液，CBD-(G₄S)₃-TpN15，CBD-(G₄S)₃-TpN17，CBD-(G₄S)₃-TpN47按1:1:1的摩尔比加入悬液，37℃，180rpm孵育30min；

(2) 4℃，4000rpm，5min收集沉淀，上清可回收再利用，相同体积0.1M Tris-Cl缓冲液洗三遍后，相同体积0.1M Tris-Cl重悬；

(3) 加入质量体积比1%的脱脂奶粉后，轻微颠倒溶解，37℃，180rpm孵育30min；

(4) 4℃，4000rpm，5min收集沉淀，相同体积0.1M Tris-Cl缓冲液洗三遍后，1/10体积0.1M Tris-Cl重悬备用。