[发明专利]一种梅毒特异抗体的检测探针及其制备方法

说明书

本发明涉及一种梅毒特异性抗体的检测探针及其制备方法。本发明探针基于金葡菌的检测载体，三种梅毒抗原和噬菌体裂解酶结合域融合，并标记在金葡菌检测载体上。本发明利用噬菌体裂解酶结合域和金葡肽聚糖的结合能力，将三种梅毒抗原同时标记在金葡菌载体的表面，获得一种梅毒特异抗体检测的新型生物探针。可以利用这种新型探针对梅毒血清特异抗体进行快速的协同凝集检测。

技术领域

本发明涉及性传播疾病病原体梅毒螺旋体的特异性抗体检测领域，具体来说，涉及一种梅毒特异性抗体的新型检测探针及其制备方法。

背景技术

梅毒(Syphilis)由细菌梅毒螺旋体(Treponema pallidum, TP)亚种引起，可通过直接性接触、输血、母婴等方式传播。梅毒是报告病例数最多的性病，严重危害人类健康。梅毒的检测为梅毒的感染诊断、分期指导、治疗方案和治疗效果提供评价依据。早期梅毒仍可治愈，因此早期检测与术前筛查对于患者准确诊断、及时治疗、有效预后、尽早切断传染源以及有效管理都意义重大，可有效降低梅毒长期并发症的风险，降低死胎、先天性梅毒以及传播风险，能极大减轻梅毒带来的家庭、社会和国家负担。

梅毒检测主要分为病原体与血清学检测。通常，患者出现明显症状时，可进行病原体检测；患者无明显症状，进行血清学检测。病原体检测包括暗视野显微镜法、镀银染色法和核酸检测法。由于大多数梅毒感染者早期无明显症状，血清学检测是主要的实验室梅毒检测方法。

梅毒螺旋体是一种非常复杂的微生物，含有很多抗原物质。电镜下梅毒螺旋体的最外层为外膜，外膜内是胞浆膜，两者之间是鞭毛。人体感染梅毒后，会产生两类抗体，一类是抗梅毒螺旋体的特异抗体，另一类是抗类脂质的梅毒非特异抗体，主要是心磷脂(Cardiolipin)抗体。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种梅毒特异性抗体的检测探针及其制备方法。可以利用这种新型探针对梅毒血清特异抗体进行快速的协同凝集检测。

本发明基于发明人之前参与发明的新型多色多功能金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，SA）检测载体（中国专利ZL 2014 1 0462482.2）、金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶（Lysin）结合域（Cell binding domain, CBD）等研究成果，利用CBD和梅毒抗原融合蛋白标记金葡菌载体，用于梅毒特异抗体的快速检测。该方法不依赖仪器，通过裸眼观察即可在5-10分钟内实现对特异抗体的检测。

目前，血清学诊断常用梅毒抗原有Tpp15, Tpp17, Tpp47，这三种抗原在各期梅毒中都有较强的表达，可用于梅毒筛查。多种抗原融合可提高检测的敏感性和特异性，常用的嵌合基因有Tpp15-47, Tpp15-17, Tpp17-47, Tpp15-47-17。

在本发明中，不通过抗原基因间的融合，而是Tpp15, Tpp17, Tpp47通过(G₄S)₃柔性linker同CBD分别融合，得到的蛋白Tpp15-(G₄S)₃-CBD，Tpp17-(G₄S)₃-CBD, Tpp47-(G₄S)₃-CBD同新型金葡菌载体共同孵育，得到结合有这三种蛋白的金葡探针，不仅可以充分的暴露抗原位点，而且(G₄S)₃linker可以减少空间位阻，会有更好的灵敏度和特异性。

本发明所述的梅毒特异性抗体的检测探针，是将梅毒螺旋体三种抗原Tpp15,Tpp17, Tpp47通过(G₄S)₃柔性linker同CBD分别融合，得到的蛋白Tpp15-(G₄S)₃-CBD、Tpp17-(G₄S)₃-CBD、Tpp47-(G₄S)₃-CBD同时标记在红色灭活的金葡菌载体的表面。