[发明专利]用于产前无创检测21三体综合征的PCR扩增组合物及检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于产前无创检测21三体综合征的PCR扩增组合物及检测试剂盒，所述PCR扩增组合物包括3对特异性引物，用于扩增21染色体的3个位点：SIM、YBEB和SIK。本发明可以快速进行产前胎儿三体检测，能广泛应用到产前检测环节，具有灵敏度高、检测过程时间短、成本低等优点，有望代替无创DNA检测，可减轻产妇家庭的检测费支出，带来良好的经济效益和社会效益；本发明的试剂盒可通过引物合成快速构成，随时应用到检测当中，具有良好的产品开发潜质。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，特别涉及一种用于产前无创检测21三体综合征的PCR扩增组合物及检测试剂盒。

背景技术

随着社会的发展，男女成婚年龄、生育年龄不断增长，在生育方面遇到的问题也越来越多。优生少生概念成为社会的主流思想，对新生儿健康的关注度也越来越高。其中，唐氏综合症(DS，Down's syndrome)或21三体综合症是当前最常见的遗传疾病。在新生儿中，DS的发病率高达1/700，并且发病率会随着产妇年龄的增加而增加。目前，主要是通过产前筛查来避免DS新生儿的出现，产前筛查的手段分唐氏筛查、无创DNA诊断和羊水穿刺，而这些检测方法都存在一些缺点，唐氏筛查准确率低，只能作为预筛选手段，无创DNA检测时间较长、费用高，羊水穿刺是检测的金标准可是却有流产的风险。目前，产前筛选通过唐氏筛查确定高风险组(21三体风险值≥1/270或18三体风险值≥1/350)和临界风险组(1/1000≤21三体风险值1/270或1/1000≤18三体风险值1/350)，之后进行无创DNA检测，最后对高风险产妇做羊水穿刺。

无创DNA检测是利用高通量测序技术，对产妇外周血中游离DNA做测序分析，但该操作程序繁杂，自动化程度不高，而且单次运行成本偏高等问题。此外，因cfDNA片段化严重，提取得率不高等问题，加大了高质量文库制备的难度和数据分析的难度。整项检测时间较长，且对样本的要求较高，一旦测试失败就会浪费大量的时间，对产妇生育造成不良的影响。

所以现在需要一种更可靠的方案。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种用于产前无创检测21三体综合征的PCR扩增组合物及检测试剂盒。本发明利用胎儿与母体甲基化位点存在差异的特点，针对胎儿特异的甲基化位点设计了3组特异引物，通过对母体血液游离DNA(cfDNA)进行分析，由于母体血液游离DNA(cfDNA)中胎儿DNA占总游离DNA的5％～10％，经过数量对比关系对比可以对胎儿是否患21三体综合征做出判断，整个检测过程时间短，成本低，可有望代替无创DNA检测，能减轻产妇家庭的检测费支出，带来良好的经济效益和社会效益。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：提供一种用于产前无创检测21三体综合征的PCR扩增组合物，所述PCR扩增组合物包括3对特异性引物，用于扩增21染色体的3个位点：SIM、YBEB和SIK，所述3对特异性引物分别为：

扩增SIM的上游引物的核酸序列为：ACTCAGTGGTGTCGCCTCG，

扩增SIM的下游引物的核酸序列为：CGTCCCCAACCATCCAAG，

扩增YBEB的上游引物的核酸序列为：CGCACGGCCTACTCAAGTCTC，

扩增YBEB的下游引物的核酸序列为：TGGCGTCGGAGGTGAGGC，

扩增SIK的上游引物的核酸序列为：GAGCCAGGTCTGTTCTCCACG，

扩增SIK的下游引物的核酸序列为：AGCCGATGCCCTTGTTGC。

优选的是，还包括荧光定量PCR预混液。

本发明还提供一种用于产前无创检测21三体综合征的检测试剂盒，其包括如上所述的用于产前无创检测21三体综合征的PCR扩增组合物。