[发明专利]基于抗原识别及上转换荧光FRET猝灭的冠状病毒检测试纸的制备方法和使用方法

说明书

基于抗原识别及上转换荧光FRET猝灭的冠状病毒检测试纸的制备方法和使用方法，它属于纳米生物医学诊断检测技术领域。本发明要解决现有冠状病毒检测耗时繁琐且对设备要求较高的问题。制备方法：一、金纳米颗粒溶液的制备；二、Ybsupgt;3+/supgt;和Ersupgt;3+/supgt;掺杂的NaGdFsubgt;4/subgt;上转换纳米粒子的制备；三、UCNPs‑抗原的制备；四、AuNPs‑抗体的制备；五、试纸条的组装。使用方法：①、得到标准曲线；②、定性及得到荧光猝灭曲线；③、定量。本发明用于基于抗原识别及上转换荧光FRET猝灭的冠状病毒检测试纸的制备和使用。

技术领域

本发明属于纳米生物医学诊断检测技术领域。

背景技术

冠状病毒引起的感染主要发生在冬季和早春。冠状病毒引起的人类疾病主要是呼吸系统感染。新型冠状病毒(SARA-CoV-2)是以前在人体内从未发现的新型毒株。冠状病毒的感染可以产生以下临床症状：(1)呼吸系统感染，包括重急性呼吸系统综合症(SARS)；(2)肠道感染；神经系统症状。

目前，关于新型冠状病毒的检测试剂主要是核酸检测试剂和抗体检测试剂，核酸检测是目前应用最多的检测手段。但是核酸检测的PCR技术所需设备庞大，检测费时耗力，对于实验室分区和操作的人员要求高，难以满足公共卫生事件的应急需要。

免疫检测中最常用的是免疫试纸条。免疫层析技术(ImmunochromatographicAssay,ICA)是一种将免疫技术和色谱分析技术结合起来的方法，具有特异性，操作简单、快速等方法。传统免疫层析技术以金纳米颗粒为标记物，通过条带显色对目标物定性检测或半定量分析。虽然方法简单快捷，但是灵敏度较差，难以准确定量。荧光免疫试纸条技术以抗原抗体间的特异性识别为基础，以荧光微球作为信号标签，通过荧光信号实现对待测样品中目标分析物精准和快速定量，广泛应用于临床医学领域。荧光免疫层析技术保留了传统金纳米颗粒试纸的快速检测特点，同时又具有荧光检测技术的高灵敏的特点，提高了免疫检测性能。

荧光免疫层析技术以固定的检测线(包被抗体或包被抗原)和质控线(包被抗体)的条状纤维层材料为固定相，测试液为流动相，荧光标记抗体或抗原固定于连接垫，通过毛细管作用使待分析物在层析条上移动。对于带有多个抗原决定簇的大分子抗原(蛋白、病毒致病菌等)，通常采用待测物在流动相作用下先与荧光标记抗体相结合，当样本达到检测线时再与包被抗体结合形成双抗夹心的“三明治”型的免疫层析方法。

免疫层析试纸条中上转换荧光纳米颗粒是将长波长的激发光转换为短波长的发射光的纳米颗粒，一般通过颗粒的组成获得不同的吸收和发射光谱。

发明内容

本发明要解决现有冠状病毒检测耗时繁琐且对设备要求较高的问题，而提供基于抗原识别及上转换荧光FRET猝灭的冠状病毒检测试纸的制备方法和使用方法。

基于抗原识别及上转换荧光FRET猝灭的冠状病毒检测试纸的制备方法，它是按以下步骤进行的：

一、金纳米颗粒溶液的制备：

①、种子液的制备：在温度为26℃～28℃的条件下，将去离子水和CTAB溶液混合，然后以加入速度为0.5mL/s～1mL/s，加入HAuCl₄溶液，在温度为26℃～28℃及搅拌速度为50rpm～60rpm的条件下，搅拌10s～20s，再加入冰浴NaBH₄溶液，在温度为26℃～28℃及搅拌速度为50rpm～60rpm的条件下，搅拌100s～120s，得到种子液；