[发明专利]一种抗辐射不动杆菌的定量检测方法和定量检测试剂盒及其应用在审
| 申请号： | 202110498506.X | 申请日： | 2021-05-08 |
| 公开（公告）号： | CN113005182A | 公开（公告）日： | 2021-06-22 |
| 发明（设计）人： | 王彩霞;王玥;马来记;施雁勤;周亮;李学娇 | 申请（专利权）人： | 上海应用技术大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海申汇专利代理有限公司 31001 | 代理人： | 徐俊 |
| 地址： | 200235 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 辐射 不动 杆菌 定量 检测 方法 试剂盒 及其 应用 | ||
1.一种抗辐射不动杆菌的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：提取待测样品中的总RNA；
步骤2：将提取的总RNA反转录成cDNA，以cDNA为模板，采用扩增抗辐射不动杆菌的特异性引物对进行荧光定量PCR扩增得到PCR扩增产物；
步骤3：测出PCR扩增产物的Ct值，将Ct值代入预先拟合的标准曲线方程中，从而计算出样品中抗辐射不动杆菌的数量。
2.如权利要求1所述的抗辐射不动杆菌的定量检测方法，其特征在于，所述步骤1中提取待测样品中的总RNA为采用Trizol试剂盒进行提取。
3.如权利要求1所述的抗辐射不动杆菌的定量检测方法，其特征在于，所述步骤2中的将提取的总RNA反转录成cDNA采用的是M-MLV RTase cDNA Synthesis Kit反转录试剂盒。
4.如权利要求1所述的抗辐射不动杆菌的定量检测方法，其特征在于，所述步骤2中的扩增抗辐射不动杆菌的特异性引物对包括序列如SEQ ID No:l所示的上游引物和序列如SEQ ID No:2所示的下游引物。
5.如权利要求1所述的抗辐射不动杆菌的定量检测方法，其特征在于，所述步骤2中的荧光定量PCR扩增的反应体系包括Premix Ex TaqTM5μL，0.2μmol/L上、下游引物各2.5μL，1.0ng/μL的cDNA模板1.0μL，用ddH2O补足至25.0μL。
6.如权利要求1所述的抗辐射不动杆菌的定量检测方法，其特征在于，所述步骤2中的荧光定量PCR扩增的过程包括：94～95℃下预变性25～30s；94～95℃下变性5～30s后60℃下退火20～30s，进行35～45个循环。
7.如权利要求6所述的抗辐射不动杆菌的定量检测方法，其特征在于，所述步骤2中的荧光定量PCR扩增的过程包括：95℃下预变性30s；95℃下变性30s后60℃退火25s，进行40个循环。
8.一种抗辐射不动杆菌的定量检测试剂盒，其特征在于，包括RNA提取试剂、RNA反转录试剂、PCR扩增反应试剂、扩增抗辐射不动杆菌的特异性引物以及PCR外标准品。
9.如权利要求8所述的抗辐射不动杆菌的定量检测试剂盒，其特征在于，所述的RNA提取试剂为Trizol试剂盒，所述的反转录试剂盒为M-MLV RTase cDNA Synthesis Kit；所述的PCR扩增反应试剂为Premix Ex TaqTM试剂盒，所述的扩增抗辐射不动杆菌的特异性引物对包括序列如SEQ ID No:l所示的上游引物和序列如SEQ ID No:2所示的下游引物；所述的PCR外标准品为抗辐射不动杆菌ATCC 43998的总RNA反转录后所得总cDNA。
10.权利要求8或9所述的抗辐射不动杆菌的定量检测试剂盒的应用，其特征在于，包括用于定量检测皮肤中的抗辐射不动杆菌。
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