[发明专利]基于金纳米颗粒的免疫层析试纸检测8-羟基-2’-脱氧鸟苷的方法在审
申请号: | 202110499533.9 | 申请日: | 2021-05-08 |
公开(公告)号: | CN113447647A | 公开(公告)日: | 2021-09-28 |
发明(设计)人: | 叶伟伟;王丽文;张宇;钱天润 | 申请(专利权)人: | 浙江工业大学 |
主分类号: | G01N33/543 | 分类号: | G01N33/543;G01N33/558 |
代理公司: | 杭州斯可睿专利事务所有限公司 33241 | 代理人: | 王利强 |
地址: | 310014 浙江省*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 基于 纳米 颗粒 免疫 层析 试纸 检测 羟基 脱氧 方法 | ||
1.一种基于金纳米颗粒的免疫层析试纸检测8-羟基-2'-脱氧鸟苷的方法,其特征在于:所述方法包括以下步骤:
(1)金纳米颗粒制备和表面生物功能化处理:采用柠檬酸钠还原高氯金酸的方法制备金纳米颗粒,并在金纳米颗粒表面修饰8-OHdG抗体,金纳米颗粒和8-OHdG抗体的体积比为10:1~2:1,制得的金标抗体在4℃下保存备用;
(2)8-OHdG完全抗原制备:配置8-OHdG溶液、牛血清蛋白BSA溶液和碳二亚胺盐酸盐EDC溶液,8-OHdG溶液和BSA溶液用稀盐酸调节pH至5,三种溶液混合并震荡,所述8-OHdG溶液、BSA溶液和EDC溶液的体积比为50:5:1~10:5:1;室温反应1.5~2.5h后,用500MW的透析膜和500mL 1×PBS透析过夜,于4℃下保存备用;
(3)免疫层析试纸搭建:免疫层析试纸包括样品垫(1)、结合垫(2)、检测线(3)、质控线(4)、硝酸纤维素膜(5)、吸水垫(6)和PVC底板(7),将样品垫(1)、结合垫(2)、硝酸纤维素膜(5)和吸水垫(6)依此粘贴在PVC底板(7)上,相互之间重叠1-2mm;在结合垫(2)上喷涂步骤(1)制备好的金标抗体,在硝酸纤维素膜(5)上以0.5~1.5μL/cm的量喷涂步骤(2)制备好的8-OHdG完全抗原与羊抗鼠IgG,分别为检测线(3)和质控线(4),干燥20~40min;将干燥后的试纸切成宽为3~6mm的试纸条,放入密封袋中加干燥剂保存;
(4)8-OHdG的测定:配置含有BSA、吐温-20、蔗糖和NaCl的上样液,用上样液配置不同浓度的8-OHdG样液,将8-OHdG样液滴加到步骤(3)制备好的试纸条上,反应3~5min后,在可见光下观察结果。
2.根据权利要求1所述的基于金纳米颗粒的免疫层析试纸检测8-羟基-2'-脱氧鸟苷的方法,其特征在于:所述步骤(1)中,8-OHdG抗体浓度为0.5~1.5μg/mL,金纳米颗粒的浓度为4~40nM,金标抗体的浓度为40~400nM。
3.根据权利要求1或2所述的基于金纳米颗粒的免疫层析试纸检测8-羟基-2'-脱氧鸟苷的方法,其特征在于:所述步骤(2)中,8-OHdG溶液浓度为0.5~1.5g/L,BSA溶液浓度为3~5g/L,EDC浓度为25~30g/L,8-OHdG完全抗原的浓度为1mg/mL。
4.根据权利要求1或2所述的基于金纳米颗粒的免疫层析试纸检测8-羟基-2'-脱氧鸟苷的方法,其特征在于:所述步骤(3)中,金标抗体的喷涂量为4~6μL,金标抗体的喷涂浓度为400~4000nM,羊抗鼠IgG的浓度为0.5~1.5mg/mL。
5.根据权利要求1或2所述的基于金纳米颗粒的免疫层析试纸检测8-羟基-2'-脱氧鸟苷的方法,其特征在于:所述步骤(4)中,BSA的质量分数为0.5~1.5%,吐温-20的质量分数为1~5%,蔗糖的质量分数为1~5%,NaCl的质量分数为0.9%,8-OHdG样液的体积为50~100μL。
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