[发明专利]一种抗核抗体化学发光定量检测的试剂盒及其检测方法和应用

说明书

本发明提供了一种抗核抗体化学发光定量检测的试剂盒及其检测方法和应用，所述的试剂盒将化学发光分析技术与酶联免疫技术相结合，灵敏度高、线性范围宽、反应迅速、操作简单，可实现抗SSA、Ro52、SSB/La、Sm、dsDNA、核小体、组蛋白、P0、PCNA、Scl‑70、Jo‑1、PM/SCl、CENP‑B、nRNP/Sm和AMA‑M2的自身抗体共15个项目联检，在辅助诊断自身免疫性疾病中具有重要价值。

技术领域

本发明属于体外检测领域，尤其涉及一种抗核抗体化学发光定量检测的试剂盒及其检测方法和其在生物医药领域中的应用。

背景技术

抗核抗体(antinuclear antibody，ANA)，又称抗核酸抗原抗体，是一组对细胞核内的DNA、RNA、蛋白或这些物质的分子复合物产生的自身抗体。按其核内各个分子的性能不同可将各ANA区分开来，如：①抗DNA抗体；②抗组蛋白抗体；③抗非组蛋白抗体；④抗核仁抗体等。每一大类又因不同抗原特性而再分为许多种类。因此ANA在广义上是一组各有不同临床意义的自身抗体，更确切的名称应为抗核抗体谱。目前临床上抗核抗体谱的检测主要包括抗SSA抗体、抗Ro52抗体、抗SSB/La抗体、抗Sm抗体、抗dsDNA抗体、抗核小体抗体、抗组蛋白抗体、抗P0抗体、抗PCNA抗体、抗Scl-70抗体、抗Jo-1抗体、抗PM/SCl抗体、抗CENP-B抗体、抗nRNP/Sm抗体、抗AMA-M2抗体。ANA主要存在于IgG，也见于IgM、IgA，甚至IgD及IgE中。抗核抗体能识别各种细胞核组分，可特征性地出现于许多自身免疫性疾病中，尤其是类风湿性疾病，可判断疾病的活动性及预后，观察治疗反应，指导临床治疗。

目前临床上抗核抗体的检测有免疫印迹法、酶免法和磁微粒化学发光。免疫印迹法应用的是膜条显色技术，其特点为固定几个项目在同一膜条测定，一般通过手工或者半自动膜条仪进行实验操作，最终通过肉眼进行定性判定，该技术灵敏度低，反应时间长。酶联免疫吸附法的灵敏度在膜条免疫法基础上有所提升，但仍然较低，并且线性范围窄，重复性差，反应时间也较长，且需要单个项目测定，无法联检，仍然不能很好满足临床的应用。磁微粒化学发光法的配合全自动化学发光仪，能定量检测抗核抗体的每一个项目，时间较长，目前市场上的厂家主要是仪器的速度受限，且仪器较大，维护保养需专业工程师定期上门服务。

专利CN106248943A公开了一种抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法，利用磁微粒化学发光法进行检测，此发明检测的是抗核抗体一个项目，而无法检测抗核抗体相关的十几种检测指标。

专利CN101329341A公开了一种检测自身免疫疾病相关抗核抗体谱的试剂盒及其制备方法，使用酶联免疫吸附法与膜条免疫法结合来进行检测，但结果仍为定性的结果，灵敏度低，线性范围窄，重复性差，反应时间长。

发明内容

本发明的第一方面，提供了一种抗核抗体(ANA)化学发光定量检测的试剂盒，所述的试剂盒包括包被有抗原的抗核抗体的试剂盘或试剂条、催化底物发光的酶标记抗体、底物。

优选的，所述的抗原包括SSA、Ro52、SSB/La、Sm、dsDNA、核小体、组蛋白、P0、PCNA、Scl-70、Jo-1、PM/SCl、CENP-B、nRNP/Sm和/或AMA-M2中的任一种或两种以上。

优选的，所述的试剂盘或试剂条选自酶标板、微孔板、胶体金、微粒、微球、亲和膜、液相芯片、玻片、试纸片或塑料球。

优选的，所述的酶选自辣根过氧化酶、葡萄糖氧化酶、丙酮酸激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、萤火虫素酶、半乳苷酶或碱性磷酸酶(ALP)，进一步优选的，所述的酶为碱性磷酸酶，所述的催化底物发光的酶标记抗体为含有碱性磷酸酶标记的羊抗人多克隆抗体。

优选的，所述的底物选自鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物、吖啶酯及吖啶酰胺类、金钢烷-1,2-二氧乙烷及其衍生物，进一步优选的，所属的底物选自金钢烷-1,2-二氧乙烷及其衍生物。