[发明专利]一种低免疫原性的海洋医用胶原蛋白及其制备方法及应用

权利要求书

1.一种低免疫原性的海洋医用胶原蛋白的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：

（1）鱼皮原料预处理：取海洋来源鱼类，去头、去内脏、除去鱼鳞，进行鱼皮肉分离，将得到的鱼皮洗净，沥干；

（2）原料脱脂及除杂蛋白：取步骤（1）预处理后的鱼皮，加入碱溶液搅拌，过滤后调整酸碱度至中性，获得除杂后的鱼皮；

（3）鱼皮糖蛋白及内毒素的去除：在步骤（2）获得的鱼皮中加入过氧化氢溶液、氢氧化钠，搅拌至鱼皮变为淡黄色，过滤后调整酸碱度至中性，获得除去表面糖蛋白及部分内毒素的鱼皮；所述鱼皮与过氧化氢溶液的料液比为1:10~1:20（w/v）；所述过氧化氢溶液的浓度为1%~2%；所述氢氧化钠在整个体系中的浓度为0.03~0.08M；

（4）鱼皮胶原蛋白的粗提取：在步骤（3）获得的鱼皮中加入酸性溶液后搅拌，离心取上清液，获得胶原蛋白粗提液；所述鱼皮与酸性溶液的料液比为1:50~1:65（w/v），所述酸性溶液的浓度为0.3~0.5M；

（5）胶原蛋白的盐析：加入盐进行盐析，收集沉淀，获得胶原蛋白沉淀；

（6）鱼皮胶原蛋白端肽的去除：将所述步骤（5）获得的胶原蛋白沉淀溶于酸性溶液中，加入蛋白酶后水解去端肽，使用弱碱溶液作为透析液进行，获得去端肽胶原蛋白；所述蛋白酶的用量为300~600U/g；水解温度为4~8℃；透析过程使用分子量小于14000Da的透析袋；透析液为0.2M弱碱溶液；

（7）去端肽胶原蛋白的脱盐：步骤（6）中去端肽胶原蛋白酸碱度为中性后，再透析脱盐，得到高纯度的去端肽医用海洋胶原蛋白溶液；

（8）去端肽医用海洋胶原蛋白的干燥及内毒素清除：真空冷冻干燥机中干燥步骤（7）获得的高纯度的去端肽医用海洋胶原蛋白溶液，进行包装及灭菌，得到所述低免疫原性的海洋医用胶原蛋白。

2.根据权利要求1所述的低免疫原性的海洋医用胶原蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中的碱溶液、所述步骤（3）中的过氧化氢溶液进行2~8℃预冷；所述步骤（4）的搅拌温度、所述步骤（5）的盐析温度为2~8℃。

3.根据权利要求1所述的低免疫原性的海洋医用胶原蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中的海洋来源鱼类包括鳕鱼、罗非鱼。

4.根据权利要求1所述的低免疫原性的海洋医用胶原蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中鱼皮与碱性溶液的料液比为1:10~1:20（w/v），所述碱溶液的浓度为0.1~0.2M。

5.权利要求1所述的制备方法制得的低免疫原性的海洋医用胶原蛋白。

6.权利要求5所述的低免疫原性的海洋医用胶原蛋白在制备医用胶原蛋白中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述低免疫原性的海洋医用胶原蛋白的羟脯氨酸含量为9.0~9.2%；核酸含量低于300ng/mg。