[发明专利]一种低免疫原性的海洋医用胶原蛋白及其制备方法及应用

说明书

本发明提出了一种低免疫原性的海洋胶原蛋白及其制备方法和应用。所述低免疫原性的海洋胶原蛋白的制备方法包括：对鱼皮进行预处理、脱脂及除杂蛋白、去除糖蛋白及内毒素、粗提取、盐析、去端肽、脱盐、包装及灭菌，得到一种低免疫原性的海洋胶原蛋白。本发明通过合理的免疫原性物质去除手段，除去端肽、糖蛋白及内毒素等富含胶原蛋白的天然组织中存在的免疫原性物质，同时还可去除细胞抗原，使机体的免疫反应大大降低，从而减少了材料的免疫原性。所述低免疫原性的海洋胶原蛋白具有纯度高、保持三螺旋结构、活性强、性能好等特点，提供海洋胶原蛋白基医用材料和医疗器械开发的物质基础和技术保证。

技术领域

本发明属于医用材料制备技术领域，具体涉及一种低免疫原性的海洋医用胶原蛋白及其制备方法及应用。

背景技术

近年来，对胶原蛋白的研究已拓展到了生物医用领域。由于胶原蛋白在细胞外基质中的优势，以及其具有的生物可降解性、低免疫原性和良好的生物相容性等特点，使其在医学和组织工程中的应用越来越广泛。目前胶原蛋白已被成功应用于止血海绵、可吸收手术缝合线、植入性胶原蛋白膜、组织工程软骨、药物缓释载体等的制备中。市场对医用胶原蛋白的需求保持高速增长，医用胶原蛋白行业在国民经济中的地位将不断提高。预测未来几年医用胶原蛋白产品国产品牌会慢慢崛起，产品慢慢向高端市场渗透，市场占有率会越来越高。

海洋生物在地球上种类繁多、数量巨大，是胶原蛋白来源的宝库。国内外学者以已经从各种水生生物的皮、鳞和骨中分离和表征了多种海洋胶原蛋白，并证明海洋胶原蛋白既存在与陆生胶原蛋白类似的特征，又具有陆生胶原蛋白所没有的人群优势、安全优势以及资源优势。相比于陆生哺乳动物，水生生物胶原蛋白在功能特性上具有较多的优点，如低乳化性、高分散性和低免疫原性等，在组织骨架、止血敷料、创伤修复膜等领域具有巨大的应用潜力。

但是，在市场调研及课题组前期的研究中发现，目前所用用到的医用胶原蛋白产品均为哺乳动物中获得的，并没有以海洋来源胶原蛋白制备的医疗器械及海洋动物来源的胶原蛋白材料。

发明内容

本发明的目的是提供一种低免疫原性的海洋医用胶原蛋白及其制备方法及应用。

为实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：

本发明提供了一种低免疫原性的海洋医用胶原蛋白的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)鱼皮原料预处理：取海洋来源鱼类，去头、去内脏、除去鱼鳞，进行鱼皮肉分离，将得到的鱼皮洗净，沥干；

(2)原料脱脂及除杂蛋白：取步骤(1)预处理后的鱼皮，加入碱溶液搅拌，过滤后调整酸碱度至中性，获得除杂后的鱼皮；

(3)鱼皮糖蛋白及内毒素的去除：在步骤(2)获得的鱼皮中加入过氧化氢溶液、氢氧化钠，搅拌至鱼皮变为淡黄色，过滤后调整酸碱度至中性，获得除去表面糖蛋白及部分内毒素的鱼皮；

(4)鱼皮胶原蛋白的粗提取：在步骤(3)获得的鱼皮中加入酸性溶液后搅拌，离心取上清液，获得胶原蛋白粗提液；

(5)胶原蛋白的盐析：加入盐进行盐析，收集沉淀，获得胶原蛋白沉淀；

(6)鱼皮胶原蛋白端肽的去除：将所述步骤(5)获得的胶原蛋白沉淀溶于酸性溶液中，加入蛋白酶后水解去端肽，使用弱碱溶液作为透析液进行，获得去端肽胶原蛋白；

(7)去端肽胶原蛋白的脱盐：步骤(6)中去端肽胶原蛋白酸碱度为中性后，再透析脱盐，得到高纯度的去端肽医用海洋胶原蛋白溶液；

(8)去端肽医用海洋胶原蛋白的干燥及内毒素清除：真空冷冻干燥机中干燥步骤(7)获得的高纯度的去端肽医用海洋胶原蛋白溶液，进行包装及灭菌，得到所述低免疫原性的海洋医用胶原蛋白。