[发明专利]一种miRNA的检测方法以及用于检测miRNA的侧流层析试纸条

说明书

本发明提供了一种miRNA的检测方法以及用于检测miRNA的侧流层析试纸条，涉及miRNA检测技术领域。所述方法包括：针对待检测的miRNA，设计合成互补DNA单链；基于所述miRNA与DNA单链形成DNA‑miRNA杂交复合物，采用免疫层析的方式进行检测。本发明提供了一种新的检测miRNA的方法，所述方法可以通过采用胶体金或荧光免疫层析等方式实现miRNA的快速检测。

技术领域

本发明涉及miRNA检测技术领域，尤其是涉及一种miRNA的检测方法以及用于检测miRNA的侧流层析试纸条。

背景技术

食品掺假已经成为当前食品安全的热点问题之一。2013年欧洲爆发的“马肉风波”，马肉被冒充牛肉进行销售，至此引发了全球对肉类掺假等食品欺诈现象的广泛关注。在我国，肉类掺假现象最为突出的是羊肉串掺假，这其中用鸭肉冒充羊肉是目前羊肉串掺假的主要手段。

当前对羊肉串的掺假鉴别主要需要解决2方面问题：快速和定量。目前肉类掺假的鉴别方法主要有基于种属特异性肽段的质谱分析方法以及基于DNA的核酸检测方法。质谱方法准确可定量，但操作复杂时间长，只能在专业实验室完成，无法实现快速检测，且蛋白质的稳定性相对较差，受到高温、高压及各种化学试剂的影响，蛋白质的结构和性质会发生不同程度的改变，因此不适用于对深加工食品的检测。以各种PCR为主的核酸检测方法只能定性无法定量，同时由于PCR的高灵敏度无法实现对沾染和掺假两种情况的判别，此外较质谱分析方法，虽然核酸法的检测时间大为缩短，但仍需要1-2小时才能完成。因此上述方法无法满足市场监管、公安等部门现场快速准确检测的要求。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种miRNA的检测方法。本发明的第二目的在于提供一种用于检测miRNA的侧流层析试纸条。

本发明提供的技术方案如下：

在一个方面，本发明提供了一种miRNA的检测方法，包括：针对待检测的miRNA，设计合成互补DNA单链；基于所述miRNA与DNA单链形成DNA-miRNA杂交复合物，采用免疫层析的方式进行检测。

在一个实施方案中，所述免疫层析包括胶体金免疫层析和荧光免疫层析中的任一种；

优选地，所述荧光免疫层析包括荧光素免疫层析和量子点免疫层析；更优选地，所述荧光免疫层析为荧光素免疫层析。

在一个实施方案中，所述检测采用侧流层析试纸进行。

在一个具体的实施方案中，将设计的荧光或胶体金标记好的生物素化DNA单链探针直接固定在试纸的结合垫上；所述试纸的检测线T线上包被有识别RNA-DNA杂交复合物的抗体，质控线C线上包被有链霉亲和素。

在另一个具体实施方案中，将胶体金或荧光标记的S9.6抗体直接固定在试纸的结合垫上，所述试纸的检测线T线上包被有识别RNA-DNA杂交复合物的抗体，质控线C线上包被有抗鼠IgG。

在一个实施方案中，采用胶体金试纸条/荧光试纸条进行检测。所述试纸条包括样品垫、结合垫、NC膜、底板、检测线T线、质控线C线和吸水垫。

在一个实施方案中，所述试纸条的结合垫为胶体金标记的金标垫或者结合有荧光素标记物的结合垫。

在一个实施方案中，所述试纸条的结合垫上含有胶体金/荧光材料标记的能与miRNA特异性结合的DNA探针或胶体金/荧光材料标记的能与miRNA-DNA复合物特异性结合的S9.6抗体。

在一个实施方案中，所述胶体金标记物为纳米金。