[发明专利]用于提取细菌中质粒DNA的方法

权利要求书

1.一种用于提取细菌中质粒DNA的方法，其特征在于，在两个串联的混合组件中实现质粒DNA生产过程中的裂解和中和，具体包括以下步骤：

(1)混合；

(2)裂解；

(3)中和；

其中，步骤(1)在第一混合组件中完成，步骤(2)在裂解螺旋管中完成，步骤(3)在第二混合组件中完成，所述第一混合组件、裂解螺旋管和第二混合组件依次串联。

2.根据权利要求1所述的用于提取细菌中质粒DNA的方法，其特征在于，所述第一混合组件的转速为50rpm-1500rpm，优选为200rpm-500rpm；所述第二混合组件的转速为20rpm-1000rpm，优选为150rpm-500rpm。

3.根据权利要求1所述的用于提取细菌中质粒DNA的方法，其特征在于，所述第一混合组件和第二混合组件的结构各自独立地选自搅拌式、乳化式和离心式中的任一种，所述第一混合组件和第二混合组件均优选为混合泵或搅拌器；优选地，所述第一混合组件为搅拌式或乳化式，所述第二混合组件为离心式。

4.根据权利要求3所述的用于提取细菌中质粒DNA的方法，其特征在于，所述第一混合组件和第二混合组件分别为第一混合泵和第二混合泵，所述第一混合泵和第二混合泵的泵腔体积与单个混合泵额定每分钟进料体积的比值范围均为1：6-1:1，优选为1:6-1:3；或

所述第一混合泵和第二混合泵的泵腔体积均为料液流经泵腔内10s-60s的体积，优选为料液流经泵腔内10s-20s的体积。

5.根据权利要求4所述的用于提取细菌中质粒DNA的方法，其特征在于，所述裂解螺旋管内径为0.5cm-15cm，优选为0.5cm-6cm；所述第一混合泵和第二混合泵的泵头直径均为2cm-100cm，优选为4cm-30cm。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的用于提取细菌中质粒DNA的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述裂解的时间为2min-10min，优选5min。

7.根据权利要求3所述的用于提取细菌中质粒DNA的方法，其特征在于，所述第一混合泵和第二混合泵的叶轮均包括后盖板；所述后盖板上均匀分布有多个导流柱，所述导流柱上至少沿叶轮旋转方向的外侧面呈弧面设置。

8.根据权利要求7所述的用于提取细菌中质粒DNA的方法，其特征在于，所述导流柱为圆柱、圆台或扇形柱的一种或多种组合；优选地，所述导流柱的横截面宽度为0.5mm-40mm，优选为2mm-10mm；所述导流柱优选为圆柱，或所述导流柱的截面积中间最大，且由中间至两端的截面积逐渐变小。

9.根据权利要求1-8任一项所述的用于提取细菌中质粒DNA的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

(1)用溶液I重悬菌体后，得到重悬菌液，再将重悬菌液、溶液II导入第一混合组件混合，得到菌体混合液；

(2)所述菌体混合液从第一混合组件中流出，进入裂解螺旋管裂解，裂解后得到裂解液；

(3)所述裂解液与溶液III导入第二混合组件后(或所述裂解液与溶液III混合后，再通入第二混合组件)，进行中和反应，中和完成后得到中和反应液；

优选地，得到中和反应液后，还包括将其进行固液分离和纯化的步骤。

10.根据权利要求9所述的用于提取细菌中质粒DNA的方法，其特征在于，步骤(1)中，溶液I与菌体的体积质量比为3-20:1(L:kg)，优选为7:1(L:kg)，溶液I与溶液II的体积比为1:0.5-3，优选为1:1；或

步骤(3)中，裂解液与溶液III的体积比为1:0.3-5，优选为1:1；

优选地，通过过滤组件进行固液分离，所述过滤组件结构为筛网式、深层过滤式、离心过滤式其中一种或多种组合；

进一步优选地，所述过滤组件为筛网式或深层过滤式结构；过滤孔径为0.2μm-800μm；过滤材质包括纤维素、硅藻土、活性炭、聚丙烯纤维和硅胶。