[发明专利]一种有效抑制干细胞分化的无血清、无饲养层培养基及培养方法

权利要求书

1.一种组合物，其特征在于，包括TGF-β和Activin。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述TGF-β选自TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3或TGF-β1β2；

优选地，所述TGF-β为TGF-β1；

优选地，所述TGF-β浓度为1-20μg/L；更优选地，所述TGF-β浓度为1-10μg/L；更优选地，所述TGF-β浓度为2μg/L；

更优选地，所述TGF-β为TGF-β1，其浓度为2μg/L。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述Activin选自Activin A、Activin B、Activin C，Activin AB或Activin AC；

优选地，所述Activin为Activin A；所述Activin A工作浓度为1-30μg/L；更优选地，所述Activin A工作浓度为10-20μg/L；更优选地，所述Activin A工作浓度为12.5μg/L。

4.根据权利要求1-3任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括碱性成纤维细胞生长因子；

优选地，所述碱性成纤维细胞生长因子为重组人碱性成纤维细胞生长因子bFGF；所述重组人碱性成纤维细胞生长因子bFGF工作浓度为5-150μg/L；更优选地，所述重组人碱性成纤维细胞生长因子bFGF工作浓度为40μg/L。

5.根据权利要求1-4任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括氨基酸，所述氨基酸选自还原型谷胱甘肽、L-谷氨酰胺、NEAA中的一种或多种；所述还原型谷胱甘肽工作浓度为1-10mg/L；所述L-谷氨酰胺工作浓度为100-1000μM；优选地，所述NEAA工作浓度为10-500μM；所述L-谷氨酰胺工作浓度为400μM；更优选地，所述NEAA工作浓度为100μM；所述还原型谷胱甘肽工作浓度为2mg/L。

6.根据权利要求1-5任一项所述的组合物，其特征在于，包括抗氧化剂；

优选地，所述抗氧化剂为抗坏血酸钠；所述抗坏血酸钠工作浓度为1-100mg/L；更优选地，所述抗坏血酸钠工作浓度为64mg/L。

7.根据权利要求1-6任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括NaHCO3、亚硒酸钠、乙二胺四乙酸铁、硫酸锌；

优选地，NaHCO3工作浓度为100-1000mg/L，亚硒酸钠工作浓度为1-50μg/L，乙二胺四乙酸铁工作浓度为100-400μM，硫酸锌工作浓度为1-50μg/L；

更优选地，NaHCO3工作浓度为500mg/L，亚硒酸钠工作浓度为30μg/L，乙二胺四乙酸铁工作浓度为300μM，硫酸锌工作浓度为10μg/L。

8.权利要求1-7任一项所述的组合物在干细胞培养中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，组合物可维持干细胞未分化状态至少10代；优选地，组合物通过调节Nanog信号通路维持干细胞未分化状态。

10.一种干细胞无血清培养基，其特征在于，所述干细胞无血清培养基包括基础培养基和权利要求1-7任一项所述的组合物；

优选地，所述基础培养基为无血清培养基；

更优选地，所述无血清培养基为DMEM/F12。

11.一种干细胞的培养方法，其特征在于，所述培养方法包括以下步骤：将干细胞接种于权利要求10所述的干细胞无血清培养基中培养；

优选地，所述干细胞为人类干细胞；

更优选地，所述干细胞为人类胚胎干细胞或多能干细胞；

优选地，所述培养方法不需要饲养层细胞。