[发明专利]糖胺聚糖己糖胺测定方法

权利要求书

1.一种糖胺聚糖己糖胺测定方法，其特征是，包括以下步骤：

第一步、按预定方法对系列浓度的标准糖胺聚糖的溶液进行处理并测定吸光度，建立标准曲线；所述标准糖胺聚糖为己糖胺含量已知的糖胺聚糖；所述系列浓度所属的范围为0-100μg/ml，所述系列浓度的数量为至少5个；

第二步、按预定方法对目标糖胺聚糖样品的溶液进行处理并测定吸光度，根据第一步所得标准曲线、并结合标准糖胺聚糖中的己糖胺含量计算出目标糖胺聚糖样品的己糖胺含量；

所述预定方法为：将糖胺聚糖溶液在酸性条件下加热水解，冷却后加入亚硝酸钠进行反应，之后加入氨基磺酸氨进行中和并使pH呈弱酸性；然后加入显色剂MBTH进行络合，再加入氯化铁中和过量的MBTH并显色；检测650nm处的吸光度；

所述预定方法中，将糖胺聚糖溶液在酸性条件下加热水解的具体过程为：向糖胺聚糖溶液中加入盐酸溶液后加热至105℃-110℃并搅拌至少2小时；其中，所述盐酸溶液的浓度为0.5±0.1M，所述盐酸溶液的体积与糖胺聚糖溶液体积比为0.2±0.05：10；

所述预定方法中，冷却是指冷却至环境温度；加入亚硝酸钠进行反应的具体过程为：加入亚硝酸钠溶液并在环境温度下搅拌至少15分钟；所述亚硝酸钠溶液的质量浓度为2.5±0.5％，所述亚硝酸钠溶液的体积与糖胺聚糖溶液体积比为0.4±0.1：10；

所述预定方法中，弱酸性是指4pH7；加入氨基磺酸氨进行中和的具体过程为：加入氨基磺酸氨溶液并在环境温度下搅拌至少5分钟；所述氨基磺酸氨溶液的质量浓度为12.5±1％，所述氨基磺酸氨溶液的体积与糖胺聚糖溶液体积比为0.2±0.05：10；

所述预定方法中，加入显色剂MBTH进行络合的具体过程为：加入MBTH溶液并在37℃±1℃下搅拌至少30分钟；其中，所述MBTH溶液的质量浓度为0.25±0.05％，所述MBTH溶液的体积与糖胺聚糖溶液体积比为0.2±0.05：10；

所述预定方法中，加入氯化铁中和过量的MBTH的具体过程为：加入氯化铁溶液并在37℃±1℃下孵育至少5分钟；其中，所述氯化铁溶液的质量浓度为0.5±0.05％，所述氯化铁溶液的体积与糖胺聚糖溶液体积比为0.2±0.05：10。

2.根据权利要求1所述的糖胺聚糖己糖胺测定方法，其特征是，所述标准糖胺聚糖的己糖胺含量通过已有方法进行标定，所述已有方法包括高效液相色谱法。

3.根据权利要求1所述的糖胺聚糖己糖胺测定方法，其特征是，所述系列浓度为：0、10、20、30、40μg/ml。

4.根据权利要求1所述的糖胺聚糖己糖胺测定方法，其特征是，所述预定方法中，先将样品冷却至环境温度后，再在650nm处检测吸光度。