[发明专利]一种双功能抗原、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种双功能抗原，所述双功能抗原由肺炎球菌荚膜多糖和SARS-CoV-2的刺突S蛋白或其片段共价偶联构成；

所述双功能抗原中，各血清型的所述肺炎球菌荚膜多糖与所述刺突S蛋白或其片段的质量比为0.2-2:1。

2.如权利要求1所述的双功能抗原，其特征在于，所述双功能抗原中，各血清型的所述肺炎球菌荚膜多糖与所述刺突S蛋白或其片段的质量比为0.7-1.2:1；

和/或，所述肺炎球菌荚膜多糖的血清型选自以下一种或多种：1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F和33F型。

3.如权利要求1所述的双功能抗原，其特征在于，所述刺突S蛋白包含如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；

优选地：

所述刺突S蛋白包含在SEQ ID NO:1上具有以下突变中的一种或多种的氨基酸序列：N36D、I40F、D46Y、Y47F、Y47W、V49F、F74W、W118R、N121K、S159N、N183Y、C220S和C220A，所述刺突S蛋白的氨基酸序列优选为SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

4.如权利要求1所述的双功能抗原，其特征在于，所述的共价偶联为通过还原胺化反应、碳二亚胺介导的缩合反应、硫烷基化反应、活泼酯法反应或者氰基化反应进行共价偶联；

优选地，所述氰基化反应中所用偶联试剂为1-氰基-4-(二甲氨基)吡啶四氟硼酸盐；和/或，所述氰基化反应中所用偶联试剂活化所述多糖上的羟基，同时偶联所述刺突S蛋白或其片段上的赖氨酸残基，形成偶联产物。

5.一种分离的核酸，所述核酸的序列为SEQ ID NO:5所示。

6.一种如权利要求1-4任一项所述的双功能抗原的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：将经偶联试剂活化后的所述肺炎球菌荚膜多糖与所述刺突S蛋白或其片段混合、反应。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，制备所述刺突S蛋白的宿主细胞包括真核细胞和原核细胞，所述真核细胞优选昆虫细胞Sf9、昆虫细胞系Hi5、CHO细胞、Vero细胞、HEK293细胞、Expi293细胞或酵母细胞，更优选为Expi293细胞；所述原核细胞优选大肠杆菌、棒状杆菌或枯草芽孢杆菌，更优选为大肠杆菌；

优选地，所述刺突S蛋白的制备包括将如权利要求5所述的核酸转化入大肠杆菌以表达所述刺突S蛋白。

8.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括如权利要求1-4任一项所述的双功能抗原；

优选地，所述药物组合物中还含有0.25-1mg/ml的铝佐剂和0.9％的氯化钠。

9.一种如权利要求1-4任一项所述的双功能抗原或如权利要求8所述的药物组合物在制备诊断、治疗或预防肺炎球菌和/或新型冠状病毒的药物中的应用，所述药物组合物优选为疫苗。

10.如权利要求5所述的核酸在制备如权利要求1-4任一项所述的双功能抗原中的应用。