[发明专利]一种鹅星状病毒卵黄抗体及其制备方法

权利要求书

1.一种鹅星状病毒卵黄抗体，其特征在于，所述卵黄抗体是采用保藏编号为CCTCC No：V202068的高致病性鹅星状病毒N-GoAstV-190123株制备的灭活疫苗作为抗原制备得到的，所述鹅星状病毒N-GoAstV-190123株在中国典型培养物保藏中心CCTCC进行用于专利程序的培养物的保藏，其保存号为：CCTCC No：V202068，分类命名为鹅星状病毒Goose astrovirus；保藏日期为2020年10月14日；保藏地址为：湖北省武汉市武汉大学保藏中心；

所述的鹅星状病毒卵黄抗体的制备方法包括如下步骤：步骤一，采用鹅星状病毒N-GoAstV-190123株制备的灭活疫苗作为免疫原对产蛋鸡进行免疫，收集高免蛋；步骤二，将高免蛋的蛋壳消毒后，收集卵黄；步骤三，从卵黄中提取鹅星状病毒卵黄抗体。

2.根据权利要求1所述的鹅星状病毒卵黄抗体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：步骤一，采用鹅星状病毒N-GoAstV-190123株制备的灭活疫苗作为免疫原对产蛋鸡进行免疫，收集高免蛋；步骤二，将高免蛋的蛋壳消毒后，收集卵黄；步骤三，从卵黄中提取鹅星状病毒卵黄抗体；

步骤一中的免疫的程序为：（1）基础免疫：将鹅星状病毒N-GoAstV-190123株灭活疫苗皮下注射健康产蛋鸡，每羽注射灭活疫苗1.0mL；（2）第二次免疫：在基础免疫后第14天进行第二次免疫接种，每羽产蛋鸡皮下注射灭活疫苗1.5mL；（3）第三次免疫：在第二次免疫接种后第14天进行第三次免疫接种，每羽产蛋鸡皮下注射灭活疫苗1.5mL；（4）维持免疫，当卵黄中鹅星状病毒卵黄抗体的琼扩抗体效价达到1:96时，维持接种1次，每羽产蛋鸡的皮下注射灭活疫苗1.5mL；

步骤二中的蛋壳消毒是将高免蛋浸入37℃的0.1%新洁尔灭水溶液中消毒20min，随后采用75％酒精棉球擦拭表面，并置于超净工作台内晾干，备用，对于蛋壳污染较为严重的高免蛋，单独用消毒水冲洗干净后，再进行浸泡消毒；

步骤三中从卵黄中提取鹅星状病毒卵黄抗体采用如下方法：量取卵黄体积，按1:8比例加入pH 5.2醋酸缓冲液，充分搅拌，于0-4℃静置12-24小时，10000r/min离心10min，取上清液；将等体积的饱和度为100%的饱和硫酸铵溶液缓慢加入离心收集的上清液中，使其饱和度达到50％，4℃静置过夜后，在4℃ 8000r/min的条件下离心20min，弃上清，留沉淀；将所得的沉淀用0.1mol/L的PBS溶液溶解至原卵黄液体积，再次加入硫酸铵使硫酸铵浓度为66.7％，混合后室温沉淀24h后，4℃8000r/min的条件下离心20min，弃上清，留沉淀，用0.1mol/L的PBS溶液加至原卵黄液体积的1/2，置于透析袋中，置0.85%的NaCl溶液中，透析过夜直至除去残余的硫酸铵，而后继续加入0.1mol/L的PBS溶液，加至原卵黄液体积。

3.根据权利要求2所述的鹅星状病毒卵黄抗体的制备方法，其特征在于，所述制备方法进一步包括浓缩与灭活，具体采用截留分子量为1000kD的超滤膜过滤除病毒，而后采用截留分子量为100kD的中空纤维超滤柱进行10倍浓缩，按照终浓度0.05%向卵黄抗体溶液中加入甲醛溶液，充分搅拌混匀，室温灭活24h，得到鹅星状病毒卵黄抗体半成品溶液。

4.一种鹅星状病毒卵黄抗体冻干制剂，其是将权利要求3中所述的鹅星状病毒卵黄抗体半成品溶液与保护剂按照1:1的比例混合，分装后于冷冻干燥机内进行冷冻干燥，至水分含量≤4%；所述保护剂的配制方法是将海藻糖、蔗糖、甘露醇、甘氨酸、精氨酸加入纯净水中配制成保护剂，所述保护剂中含有3.0%（w/v）的海藻糖、2.0%（w/v）的蔗糖、1.0%（w/v）的甘露醇、0.5%（w/v）的甘氨酸和0.5%（w/v）的精氨酸。