[发明专利]一种小儿肺咳颗粒HPLC指纹图谱的构建方法

权利要求书

1.一种小儿肺咳颗粒HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、供试品溶液的制备

称取小儿肺咳颗粒，研细，称取1～3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20～50ml，称取重量，超声处理20～40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

b、对照品溶液的制备

分别称取芦丁、甘草苷、橙皮苷、槲皮素、大黄酚、大黄素甲醚对照品，精密称定，以甲醇为溶剂，配制成不同质量浓度的混合对照品溶液，过微孔滤膜，取续滤液作为对照品溶液；

c、测定

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μl，注入高效液相色谱仪，记录100分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得小儿肺咳颗粒的HPLC指纹图谱；

步骤c中，测定的高效液相色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.05～0.5％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱，流速0.5～1.5ml/min，柱温25～45℃，检测波长210～360nm；理论塔板数按橙皮苷峰计算应不低于4000；

步骤c中，梯度洗脱过程中，流动相A、B的比例变化为：0～30min，5～15％A；30～45min，15～30％A；45～60min，30～35％A；60～80min，35～60％A；80～92min，60～80％A；92～100min，80～5％A。

2.根据权利要求1所述的一种小儿肺咳颗粒HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤a的具体步骤如下：

称取小儿肺咳颗粒，研细，称取2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称取重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

3.根据权利要求1所述的一种小儿肺咳颗粒HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤b的具体步骤如下：

分别称取芦丁、甘草苷、橙皮苷、槲皮素、大黄酚、大黄素甲醚对照品，精密称定，置于同一10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密吸取1ml置于同一10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为0.0058mg/ml、0.0125mg/ml、0.0136mg/ml、0.0122mg/ml、0.0222mg/ml、0.0051mg/ml的混合对照品溶液，过0.45μm的微孔滤膜，取续滤液作为对照品溶液。

4.根据权利要求1所述的一种小儿肺咳颗粒HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤c的具体步骤如下：

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录100分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得小儿肺咳颗粒的HPLC指纹图谱。

5.根据权利要求1所述的一种小儿肺咳颗粒HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤c中，测定的高效液相色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱为：ACE5C18-AR 250×4.60mm；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱，流速1.0ml/min，柱温30℃，检测波长280nm；理论塔板数按橙皮苷峰计算应不低于4000。

6.根据权利要求1所述的一种小儿肺咳颗粒HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤c中，所得小儿肺咳颗粒的HPLC指纹图谱共有24个共有峰，共有峰中8、9、13、19、23、24号色谱峰分别被指认为芦丁、甘草苷、橙皮苷、槲皮素、大黄酚、大黄素甲醚。

7.根据权利要求6所述的一种小儿肺咳颗粒HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤c中，按照标准指纹图谱条件对所得小儿肺咳颗粒的HPLC指纹图谱进行色谱峰归属，24个共有峰分别归属于黄芪、地骨皮、北沙参、麦冬、炙甘草、青蒿、桂枝、瓜蒌、紫菀、桑白皮、款冬花、陈皮、酒大黄、干姜、枸杞子十五味药材；1号峰归属于地骨皮、北沙参、麦冬、炙甘草、瓜蒌、桑白皮、紫菀、酒大黄、枸杞子，2号峰归属于麦冬、炙甘草、瓜蒌、枸杞子，3号峰归属于酒大黄，4号峰归属于枸杞子，5号峰归属于桑白皮、款冬花，6号峰归属于款冬花、枸杞子，7号峰归属于桑白皮，8号峰归属于黄芪、炙甘草，9号峰归属于炙甘草、酒大黄，10号峰归属于炙甘草，11号峰归属于桑白皮、陈皮，12号峰归属于款冬花，13号峰归属于陈皮，14号峰归属于黄芪、青蒿、桑白皮、款冬花，15号峰归属于款冬花，16号峰归属于酒大黄，17号峰归属于陈皮，18号峰归属于桑白皮、酒大黄，19号峰归属于黄芪、桂枝、酒大黄，20号峰归属于枸杞子、21号峰归属于酒大黄，22号峰归属于酒大黄，23号峰归属于酒大黄，24号峰归属于酒大黄。