[发明专利]一种非诊断目的基于RGO-CS-Hemin@Pt NPs纳米材料和适配体检测GPC3的方法

权利要求书

1.一种非诊断目的基于还原性氧化石墨烯-壳聚糖-血红素@纳米铂RGO-CS-Hemin@PtNPs纳米材料和适配体AptII检测GPC3的方法，其特征在于，按以下步骤进行：

步骤1：RGO-CS-Hemin@Pt NPs-AptII信号探针的制备

(1)还原性氧化石墨烯RGO的制备

氧化石墨烯GO倒入蒸馏水中，破碎均匀，加入抗坏血酸AA还原，得RGO溶液；

(2)还原性氧化石墨烯-壳聚糖RGO-CS的制备

在RGO溶液加入壳聚糖CS，超声破碎，获得RGO-CS溶液；

(3)RGO-CS-Hemin的制备

将血红素Hemin加入氨水中溶解，得Hemin溶液，取Hemin溶液加入到RGO-CS溶液中，搅拌反应，得到RGO-CS-Hemin溶液；

(4)RGO-CS-Hemin@Pt NPs复合材料制备

在RGO-CS-Hemin溶液中加入氯铂酸钠和抗坏血酸，搅拌反应，离心分离，得到 RGO-CS-Hemin@Pt NPs溶液；

(5) RGO-CS-Hemin@Pt NPs-AptII信号探针的制备

将GPC3-AptII和RGO-CS-Hemin@PtNPs溶液混合，孵育，离心去除上清液，即得RGO-CS-Hemin@Pt NPs-AptII溶液；

步骤2：电极的修饰与生物传感界面的构建

(1) 将丝网印刷电极SPCE置于H₂SO₄溶液，进行循环伏安扫描活化；

(2) 将活化后的SPCE置入含有HAuCl₄和RGO溶液的混合液中，进行恒电位沉积，得到AuNPs@RGO/SPCE；

(3) 将GPC3_AptI滴加在Au NPs@RGO/SPCE的表面，孵育，洗涤干燥，得到GPC3AptI /AuNPs@RGO/SPCE；

(4) 将GPC3标准液或者待测样品滴加到GPC3_AptI /Au NPs@RGO/SPCE表面，孵育，清洗干燥，得到GPC3/GPC3_AptI /Au NPs@RGO/SPCE；

(5) 在GPC3/GPC3_AptI/Au NPs@rGO/SPCE上滴加RGO-CS-Hemin@Pt NPs-AptII溶液，孵育，清洗干燥，得到工作电极RGO-CS-Hemin@Pt NPs-AptII/GPC3/GPC3AptI /Au NPs@RGO/SPCE；

步骤3：GPC3工作曲线的绘制

(1) 将步骤2得到的工作电极浸入到含有H₂O₂-HQ的PBS溶液，采用DPV进行扫描，记录传感器的响应电流值；

(2) 分别对不同浓度的GPC3进行检测，记录峰电流；根据传感器的电流响应值与GPC3浓度的关系，绘制GPC3的工作曲线，计算出该方法的最低检测限；

步骤4：实际血清样本中GPC3的检测

(1) 用待测实际血清样本制备的工作电极浸入到含有H₂O₂-HQ的PBS溶液里面，采用电化学工作站的DPV进行扫描，记录传感器的响应电流值；

(2) 根据步骤3所得到的工作曲线，计算得到所述待测实际血清样本中GPC3的浓度。

2.按照权利要求1所述检测GPC3的方法，其特征在于：步骤1中所述RGO-CS-Hemin@PtNPs溶液浓度为1.0 mg/mL。

3.按照权利要求1所述检测GPC3的方法，其特征在于：步骤1中所述RGO-CS-Hemin@PtNPs-AptII溶液浓度为10.0 μmol/L。

4.按照权利要求1所述检测GPC3的方法，其特征在于：步骤2中所述H₂SO₄溶液浓度为0.5mol/L，所述扫描电压为-0.4 V ~ 1.2 V，扫描圈数为20。