[发明专利]一种非诊断目的基于RGO-CS-Hemin@Pt NPs纳米材料和适配体检测GPC3的方法

说明书

一种基于RGO‑CS‑Hemin@Pt NPs纳米材料和适配体检测GPC3的方法，采用电沉积技术将Au NPs@rGO修饰在SPCE表面，通过静电吸附作用将GPC3_AptI负载在Au NPs@rGO表面，分别将GPC3和RGO‑CS‑Hemin@Pt NPs‑AptII信号探针孵育在电极表面，构建了RGO‑CS‑Hemin@Pt NPs‑AptII/GPC3/GPC3_AptI/Au NPs@rGO/SPCE夹心型电化学纳米适配体传感器。借助于RGO‑CS‑Hemin@Pt NPs的过氧化物酶作用，催化分解支持液中的H₂O₂和HQ，采用电化学工作站的DPV进行扫描，记录其峰电流，实现对GPC3的检测。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种基于纳米复合材料和适配体检测GPC3的方法。

背景技术

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 ( glypican-3 , GPC3)是一种肝癌标志物。目前GPC3检测方法主要有流式免疫分析法、电化学免疫传感器、压电免疫传感器、酶联免疫吸附法（ELISA）、放射免疫分析法等。公开号CN 111909902 A的发明专利，涉及一种杂交瘤细胞株、单克隆抗体及其制备方法和应用、制备致敏胶乳原液的方法以及试剂盒，但该方法对操作环境和技术要求较高。公开号CN 111751534 A的发明专利，涉及一种磷脂酰肌醇蛋白聚糖3检测试剂盒及其应用，但该方法所用试剂昂贵且技术要求高，因此，需要建立一种快速、灵敏、便携检测GPC3的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种基于还原性氧化石墨烯-壳聚糖-血红素@纳米铂（RGO-CS-Hemin@Pt NPs）的纳米材料，构建夹心型适配体传感器，实现GPC3检测，最低检测限为0.0647 ng/mL。

为解决该技术问题，利用RGO-CS-Hemin@Pt NPs纳米材料为载体，制备了RGO-CS-Hemin@Pt NPs-AptII信号探针；采用电沉积技术将Au NPs@rGO修饰在丝网印刷电极表面；通过静电吸附作用将GPC3适配体（GPC3_AptI）负载在修饰Au NPs@rGO的电极表面，适配体以单链形式形成不稳定的空间结构而存在电极表面；分别将GPC3和RGO-CS-Hemin@Pt NPs-AptII信号探针孵育在上述电极表面，由于GPC3能够与GPC3适配体特异性结合，形成稳定的空间结构，有序排列在电极表面，构建了RGO-CS-Hemin@Pt NPs-AptII /GPC3/GPC3_AptI/AuNPs@rGO/SPCE夹心型电化学纳米适配体传感器。借助于RGO-CS-Hemin@Pt NPs纳米材料的过氧化物酶作用，催化支持液中的H₂O₂和氢醌（HQ）并将HQ还原为苯醌（BQ）沉积在电极表面，采用电化学工作站的微分脉冲伏安法 (DPV)，记录其峰电流，从而实现对GPC3的检测。

本发明按照以下步骤进行：

步骤1：RGO-CS-Hemin@Pt NPs-AptII信号探针的制备

（1）还原性氧化石墨烯（RGO）的制备

氧化石墨烯（GO）溶液倒入蒸馏水中，超声破碎，制成GO水溶液，再加入抗坏血酸（AA）还原，得RGO溶液；

（2）还原性氧化石墨烯-壳聚糖(RGO-CS)的制备

在RGO溶液加入壳聚糖（CS），超声破碎，得到均匀的RGO-CS分散液；

（3）还原性氧化石墨烯-壳聚糖-血红素（RGO-CS-Hemin）的制备

将血红素（Hemin）加入氨水中溶解，得血红素溶液。再加RGO-CS溶液中，搅拌，得到RGO-CS-Hemin分散液；

（4）RGO-CS-Hemin@Pt NPs复合材料的制备