[发明专利]一种基于H-rGO-Pt@Pd NPs纳米酶可视化检测GPC3的方法

说明书

一种基于H‑rGO‑Pt@Pd NPs纳米酶可视化检测GPC3的方法，以H‑rGO‑Pt@Pd NPs‑Apt为检测探针，GPC3‑Ab为捕获探针，形成H‑rGO‑Pt@Pd NPs‑Apt/GPC3/Ab夹心型复合物，基于H‑rGO‑Pt@Pd NPs纳米酶的类过氧化氢酶催化活性，该复合物催化H₂O₂氧化显色底物TMB，使得体系溶液由无色变成蓝色，随着GPC3浓度的增加，体系的蓝色会越来越深，从而实现GPC3的可视化检测。该方法操作简便快捷、耗材少且具有较低的检测限。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种基于复合纳米酶材料可视化检测GPC3的方法。

背景技术

磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（GPC3）是近年来发现的一种新型肝癌标志物，常用的检测方法有：酶联免疫吸附测定法（ELISA），电化学免疫分析法，荧光检测法和免疫组织化学法等方法。公开号CN 112014577 A的发明专利，涉及一种磁珠微粒偶联鼠抗人GPC3单克隆抗体与碱性磷酸酶标记兔抗人GPC3多克隆抗体检测GPC3的试剂盒，该方法的操作过程比较复杂，试剂盒成本较高。公开号CN 105759051 B的发明专利，涉及一种以吖啶酯为发光标物的GPC3纳米磁微球化学发光免疫分析测定GPC3的试剂盒，该方法所用仪器昂贵，对操作技能有较高的要求。因此，需要建立一种快速、操作简便的GPC3检测方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种基于血红素-还原氧化石墨烯-铂@钯（H-rGO-Pt@Pd NPs）纳米酶构建检测体系，采用分光光度法可视化检测GPC3的方法。

为了解决该技术问题，采用一步还原法制备H-rGO-Pt@Pd NPs纳米酶，利用纳米酶与GPC3适配体（GPC3-Apt）的π-π共轭作用，形成H-rGO-Pt@Pd NPs-Apt检测探针，以GPC3抗体（GPC3-Ab）作为捕获探针，捕获GPC3蛋白，从而形成适配体-蛋白-抗体夹心型复合物。利用H-rGO-Pt@Pd NPs的类过氧化物酶的催化性质，催化过氧化氢（H₂O₂）氧化显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）为TMB_OX，使得体系溶液由无色变成蓝色。随着GPC3浓度的增加，体系的蓝色会越来越深，从而实现GPC3的可视化检测。

本发明按照以下步骤进行：

步骤1：H-rGO-Pt@Pd NPs纳米酶的制备

（1）还原性氧化石墨烯（rGO）的制备：

称取氧化石墨烯（GO）置于超纯水中，破碎。加入抗坏血酸（AA），搅拌，得rGO溶液。

（2）血红素-还原氧化石墨烯（H-rGO）的制备：

称取血红素，用氨水和超纯水溶解，加入rGO溶液，再加入水合肼溶液，搅拌均匀后恒温水浴，离心洗涤，即得H-rGO纳米材料。

（2） H-rGO-Pt@Pd NPs纳米酶的制备：

向H-rGO溶液中加入聚二烯丙基二甲基氯化铵（PDDA）溶液和氯化钠（NaCl）溶液，搅拌混匀，离心洗涤得到PDDA修饰的H-rGO溶液。将氯钯酸钠（Na₂PtCl₆）和氯铂酸钠（Na₂PdCl₄）溶液加入到PDDA修饰的H-rGO溶液中，搅拌反应。向溶液中加入乙二醇溶液还原，用 NaOH溶液调节pH值，恒温水浴后，离心洗涤，即得H-rGO-Pt@Pd NPs纳米酶。

步骤2：H-rGO-Pt@Pd NPs-Apt检测探针的制备

取GPC3-Apt与H-rGO-Pt@Pd NPs溶液混匀孵育，离心洗涤，即得H-rGO-Pt@Pd NPs-Apt检测探针。