[发明专利]一种叶酸的检测方法

权利要求书

1.一种叶酸的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：将叶酸样品加入至离心管中，用50℃的超纯水溶解，混匀，超声波震荡5min，之后加入高氯酸溶液和二氯甲烷，超声波震荡5min，之后离心5min；

步骤二：离心分离结束后，取出上清液，向下层残留物中加入50℃的超纯水和高氯酸溶液，重复提取一次，合并两次上清液，得到样品液；

步骤三：以聚醚砜滤膜为基膜，将水相溶液铺设于聚醚砜滤膜的上表面，浸没1-2h之后除去多余水相溶液，室温下晾干，之后向聚醚砜滤膜上表面铺设油相溶液，浸没1-2h之后除去多余油相溶液，室温下晾干，之后将聚醚砜滤膜放入真空干燥箱中，在温度为55-65℃的条件下热处理10-20min，得到复合滤膜；

步骤四：将样品液使用氨水甲醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，将洗脱液在50℃下氮吹至近干，用复溶液复溶，震荡混匀，之后用复合滤膜进行过滤，得到过滤液；

步骤五：将过滤液利用LC-MS/MS仪器上机检测定量，完成叶酸的检测；

步骤三中所述油相溶液的制备过程包括以下步骤：将对苯二甲酰氯加入正己烷中，超声分散至对苯二甲酰氯完全溶解，得到油相溶液；

步骤三中所述水相溶液的制备过程包括以下步骤：

S1：将对苯二胺加入到三口烧瓶中，之后加入冰醋酸，在温度为20-30℃，搅拌速度为100-200r/min的条件下搅拌至对苯二胺完全溶解，之后加入丙烯酸-2-乙基己酯，控制加入时间为10min，在通入氮气保护，锡纸避光的条件下将反应体系升温至80℃，冷凝回流2-3h后降温至50℃以下，减压旋蒸去除冰醋酸以及未反应的丙烯酸-2-乙基己酯，之后进行减压干燥至恒重，得到中间体1；

反应原理如下所示：

S2：将中间体1加入到三口烧瓶中，加入甲醇，在超声频率为45-65kHz的条件下超声至中间体1完全溶解，之后加入1，3-环己二甲胺，在通入氮气保护，锡纸避光的条件下将反应体系升温至35℃，反应10-12h后停止反应，将反应降温至50℃以下，减压旋蒸除去甲醇以及未反应的1，3-环己二甲胺，将旋蒸产物用乙醚沉降、洗涤三次，最后减压干燥至恒重，得到中间体2；

反应原理如下所示：

S3：将中间体2加入至蒸馏水中，之后加入十二烷基硫酸钠和三乙胺，搅拌并超声至完全溶解，得到水相溶液。

2.根据权利要求1所述的一种叶酸的检测方法，其特征在于，步骤一中所述叶酸样品、超纯水、高氯酸溶液和二氯甲烷的用量比为0.5-2g：15mL：0.5mL：5mL，所述高氯酸溶液的质量分数为60%；所述超声波震荡时的超声频率为90-100kHz，离心速度为6000rpm。

3.根据权利要求1所述的一种叶酸的检测方法，其特征在于，步骤二中所述超纯水的加入量与步骤一中超纯水加入量相同，步骤二中所述高氯酸溶液的加入量与步骤一中高氯酸溶液加入量相同。

4.根据权利要求1所述的一种叶酸的检测方法，其特征在于，步骤四中所述氨水甲醇溶液为甲醇、水、氨水按照体积比为76:19:5混合而成的混合物，所述氨水的质量分数为0.5%。