[发明专利]一种叶酸的检测方法

说明书

本发明公开了一种叶酸的检测方法，涉及检测技术领域，该检测方法中使用热水溶解，超声波震荡，有助于叶酸样品充分溶解，通过高氯酸溶液和二氯甲烷能够充分除去叶酸样品中的蛋白质和脂肪，将样品液用复合滤膜过滤，进一步去除样品液中的杂质，从而得到纯度高，杂质少的叶酸纯品；检测叶酸的过程中，制备了一种复合滤膜，通过合成一种分子中含有苯环及酰胺基团、末端为氨基的亲水性多臂化合物，与对苯二甲酰氯在两相界面处形成一层聚酰胺功能层薄膜，从而提高复合滤膜表面的亲水性，有效提高复合滤膜的分离效率，从而能够有效去除样品液中的杂质，提高叶酸的纯度。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，具体涉及一种叶酸的检测方法。

背景技术

叶酸，又称维生素M、维生素Bc等，其化学名称是蝶酰谷氨酸。叶酸通常为黄色或橙黄色薄片或针状晶体，无臭无味，熔点250℃，加热至250℃立即分解，叶酸溶于热水和碳酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠等碱性溶液，微溶于冷水、乙醇，不溶于氯仿、乙醚和苯等有机溶剂。叶酸主要分布在动物肝脏、绿叶蔬菜和微生物中，酵母细胞中含有较多的叶酸。它是维持生物体正常生命过程所必需的一类有机物质，虽然需要量很少，但对维持健康十分重要。生化与医学研究者已证明，叶酸作为一种辅助因子，对嘌呤、核酸、蛋白质的合成具有特别重要作用，另外它在帮助细胞快速分裂、生长以及修复和甲基化DNA等方面也扮演重要角色，所以不管儿童还是成人都需要叶酸来更新健康的红细胞并预防贫血。叶酸与人体健康有着非常密切的关系，主要表现在叶酸对怀孕、生育能力、心脏疾病以及癌症等方面的影响。如怀孕期间补充叶酸能够降低婴儿先天性心脏缺陷、唇裂、肢体缺陷和尿路异常的风险；服用叶酸能降低同型半胱氨酸的含量，所以可以预防心脏疾病和癌症。

由于绝大多数定量分析方法都是基于直接或间接与已知值比较而进行的，因此提供具有已知组成和性质的参考样品(即标准物质)供准确校正对于定量分析来说是非常必要的，标准物质通常要求高纯度，其组成与化学式高度一致并且化学稳定，由于对标准物质的这种严格要求，标准物质的制备一般需要在高度受控的条件下制造，以达到这种高纯度，并尽可能避免所含杂质对后续测定的影响。但是，截至目前，由于叶酸的热不稳定性和光不稳定性，叶酸的提取纯化工艺还停留在耗能大、耗时长、提取率低的初级阶段，而且得到的叶酸纯度也达不到标准物质的要求。

因此，如何解决现有的叶酸参考样品中纯度低，仍然存在大量杂质，所含杂质会对后续测定造成不利的影响是本发明需要解决的问题。

发明内容

为了克服上述的技术问题，本发明的目的在于提供了一种叶酸的检测方法：通过使用热水溶解，超声波震荡，有助于叶酸样品充分溶解，之后通过高氯酸溶液和二氯甲烷能够充分除去叶酸样品中的蛋白质和脂肪，之后将样品液用复合滤膜过滤，进一步去除样品液中的杂质，解决了现有的叶酸参考样品中纯度低，仍然存在大量杂质，所含杂质会对后续测定造成不利的影响的问题。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种叶酸的检测方法，包括以下步骤：

步骤一：将叶酸样品加入至离心管中，用50℃的超纯水溶解，混匀，超声波震荡5min，之后加入高氯酸溶液和二氯甲烷，超声波震荡5min，之后离心5min；

步骤二：离心分离结束后，取出上清液，向下层残留物中加入50℃的超纯水和高氯酸溶液，重复提取一次，合并两次上清液，得到样品液；

步骤三：以聚醚砜滤膜为基膜，将水相溶液铺设于聚醚砜滤膜的上表面，浸没1-2h之后除去多余水相溶液，室温下晾干，之后向聚醚砜滤膜上表面铺设油相溶液，浸没1-2h之后除去多余油相溶液，室温下晾干，之后将聚醚砜滤膜放入真空干燥箱中，在温度为55-65℃的条件下热处理10-20min，得到复合滤膜；

步骤四：将样品液使用氨水甲醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，将洗脱液在50℃下氮吹至近干，用复溶液复溶，震荡混匀，之后用复合滤膜进行过滤，得到过滤液；