[发明专利]一种多特异性抗体及其制备方法和用途

说明书

本申请提供了一种多特异性抗体及其制备方法和用途。所述多特异性抗体包含：a)能特异性结合第一抗原的Fab片段，其中所述Fab片段由一条轻链以及一条重链的CH1和可变区组成；b)第一肽接头，所述第一肽接头的N端与所述重链融合；c)第二肽接头，所述第二肽接头的N端与所述轻链融合，其中所述第一肽接头和所述第二肽接头之间仅能形成一个二硫键，并且各自独立地选自以下：包含Seq ID NO.1‑2所示序列中的任一种的肽接头，其中X代表除Cys的任意氨基酸，或者缺失。所述抗体可以容易地通过重组表达产生并且能够同时靶向结合两个不同抗原或同一抗原的不同表位，或更多不同抗原的多个表位。

技术领域

本申请通常涉及抗体领域。更具体地，本申请涉及一种多特异性抗体及其制备方法和用途。

发明背景

众所周知，天然抗体分子大多是二价单特异性分子。然而过去半个世纪以来，得益于抗体工程化的进展，人工产生了多种双特异性和多特异性抗体的分子。其形式多种多样，包括例如单链Fv抗体(scFv，Huston等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，85:5879-5883(1988))、四价IgG-scFv融合体(Coloma和Morrison，Nat.Biotechnol.，15:159-163(1997))、双链抗体(diabody)(Holliger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90:6444-6448(1993))、串联scFv分子(参见例如Bargou等，Science321，974-977(2008))、四价IgG-样双可变结构域抗体(“DVD-Ig”，Wu等，Nat.Biotechnol.，25:1290-1297(2007))、四价Fab串联免疫球蛋白(“FIT-Ig”)，(WO2015/103072，Epimab Biotheraupeutics)、二价大鼠/小鼠杂合双特异性IgG(Lindhofer等，J.Immunol.，155:219-225(1995))和双特异性Crossmab结合蛋白(参见例如WO 2013/026831(Roche Glycart AG)；WO 2014/167022(Engmab AG))。由于双特异性或多特异性的抗体能够结合两个或多个不同表位或抗原靶点，并且具备某些联合分子所缺少的新功能(参见，例如Sergey等，Drug Des Devel Ther.12:195–208(2018)中的综述)，因此用于治疗各种肿瘤的双特异或多特异性的抗体受到越来越多的关注，特别是用于“T细胞重定向”的双特异性抗体。这类双特异性抗体可以同时靶向肿瘤细胞上的表面抗原和T细胞表面受体(TCR)复合物的激活组分，如CD3，从而导致靶向攻击肿瘤的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的激活。这类双特异性抗体的代表形式是“双特异性T细胞接合物”或“BiTE”抗体，例如，包含通过甘氨酸-丝氨酸(G4S)接头连接的两个scFv抗体，其中一个scFv提供肿瘤抗原(例如17-1A肿瘤抗原)的结合位点，而另一个scFv提供T细胞上CD3抗原的结合位点(Mack等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92：7021-7025(1995))。抗CD3×抗CD19 BiTE抗体Blinatumomab，已被美国食品和药物管理局(FDA)批准用于治疗罕见形式的B细胞急性淋巴母细胞性白血病(ALL)。用于T细胞重定位的其他双特异性抗体形式包括但不限于四价串联双链抗体(TandAb,Kipriyanov等，J.Mol.Biol.，293:41–56(1999)；Arndt等，Blood，94:2562-2568(1999))和双亲和性重新靶向蛋白(DART，Johnson等，J.Mol.Biol.,399:436-449(2010))。