[发明专利]用于模拟细胞内渗的Transwell小室及使用方法

说明书

本发明属于检测肿瘤细胞发生向血管或淋巴管内转移能力的模拟实验技术领域，公开了一种用于模拟细胞内渗的Transwell小室及使用方法，Transwell小室包括：肿瘤细胞、Matrigel、血管内皮细胞或淋巴管内皮细胞；所述用于模拟细胞内渗的Transwell小室需配合高度超过常规24孔板高度2倍的无菌密闭容器使用。本发明将两小室拼接，有利于接种内皮细胞，较直接滴于单独小室背面，细胞悬液的体积限制较小，接种＞400ul细胞悬液；Matrigel铺于A室中，观察细胞时内皮细胞与肿瘤细胞所处平面不受Matrigel干扰，有利于荧光显微镜下观察采图。

技术领域

本发明属于检测肿瘤细胞发生向血管或淋巴管内转移能力的模拟实验技术领域，尤其涉及一种用于模拟细胞穿透血管或淋巴管壁(含内皮细胞和胞外基质)的Transwell小室及其使用方法。

背景技术

肿瘤细胞除了局部蔓延扩散，血行转移和淋巴道转移也是非常重要的转移方式，在模拟实验中，如何逼真地模拟肿瘤细胞穿透血管壁或淋巴管壁进入血管或淋巴管却是一件不容易的事情，最基本的穿壁过程的模型至少应该包含对血管内皮/淋巴管内皮细胞以及胞外基质的穿透。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：常规Transwell侵袭实验仅模拟了细胞穿透细胞外基质的过程，而无法满足实验的目的和需求。现有技术中关于用于模拟肿瘤细胞内渗的小室/模型尚未见报道。

解决以上问题及缺陷的难度为：常规单向Transwell小室仅能模拟肿瘤细胞穿越Matrigel基质的简单过程，而无法同时均匀载入血管或淋巴管内皮细胞的铺垫，因其膜面积过小，即使考虑培养基表面张力，仍无法承载超过150ul的液体，常规Transwell小室适用的24孔板也无法支持细胞悬液滴加后的继续培养。

解决以上问题及缺陷的意义为：通过改进Transwell小室为双向小室，使其可以通过A面或B面分别进行Matrigel的铺加和内皮细胞的种植，可以较为充分的模拟肿瘤细胞穿过细胞外及血管外基质和排列紧密的内皮细胞的过程(即肿瘤细胞血管内渗的过程)，且内皮细胞通过B面铺于小室膜上，生长于同一平面上，更有利于后续的图片采集。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种用于模拟细胞内渗的Transwell小室及其使用方法。

本发明是这样实现的，一种用于模拟细胞内渗的Transwell小室，所述用于模拟细胞内渗的Transwell小室自上而下为小室B，小室A；小室B，小室A在使用前粘合为一；小室A、小室B的中间部分自上而下依次为肿瘤细胞、Matrigel、血管内皮细胞或淋巴管内皮细胞。

进一步，所述血管内皮细胞或淋巴管内皮细胞为人脐静脉内皮细胞HUVEC、人肺动脉内皮细胞HPAEC或人真皮淋巴管细胞HDLEC中的一种。

进一步，所述用于模拟细胞内渗的Transwell小室可拆分为A、B两个transwell小室；A室具有完整Transwell膜，膜上孔径为8um；B室无此膜。

本发明的另一目的在于提供一种用于模拟细胞内渗的Transwell小室的使用方法，所述用于模拟细胞内渗的Transwell小室需配合高度超过常规24孔板高度2倍的无菌密闭容器使用。

进一步，所述用于模拟细胞内渗的Transwell小室的使用方法包括以下步骤：

步骤一，A室朝上，于A室中均匀平整铺入Matrigel并37℃静置使其凝固，以此模拟血管或淋巴管外基质；

步骤二，待Matrigel凝固后，于超净台中将小室翻转，B室朝上，均匀铺入内皮细胞；

步骤三，置于无菌密闭容器内，放置于细胞培养箱中培养过夜，待内皮细胞满度超过90％时，将此模型小室取出，拆分为两个独立小室，弃B室；