[发明专利]一种低温处理提高红松体胚萌发率的方法

说明书

一种低温处理提高红松体胚萌发率的方法，本发明涉及一种低温处理提高红松体胚萌发率的方法。本发明的目的是要解决现有红松在进行体细胞胚胎发生时，体胚萌发困难，萌发率低的问题。本发明方法为：一、胚性愈伤诱导、二、胚性愈伤增殖、三、体胚成熟培养、四、体胚萌发；本发明以成熟体胚为材料，采用低温处理的方法提高体胚萌发率，4℃条件下培养1周的体胚萌发率高达88.33％。本发明应用于红松体胚萌发领域。

技术领域

本发明涉及一种低温处理提高红松体胚萌发率的方法。

背景技术

森林生产力可以通过具有大量精英，高价值的树木种植来增加。其中红松(Pinuskoraiensis Sieb.et Zucc.)作为东北地区特有树种，其果实营养价值、木材利用价值和园艺观赏价值极高，是重要的用材树种，也是具有巨大发展前景的坚果经济林树种。红松作为种子繁殖的树种，其种子繁殖不稳定、繁殖周期长、遗传变异大及成本高等缺点。同时红松的良种选育历史较短，目前二代种子园尚不能提供种子，一代种子园种子数量有限，需要开发能够大规模扩繁良种的繁殖技术，且种子园不能提供它们应该具备的遗传改良的全部潜能。而获得大量精英树种的有效手段则是通过体细胞胚胎发生技术来实现。针叶树体胚发生过程主要包括，胚性愈伤组织诱导、增殖、体胚成熟和体胚萌发。其中利用体胚发生技术大规模育种的主要技术瓶颈为体胚萌发步骤，现有红松在进行体细胞胚胎发生时，体胚萌发困难，萌发率低的问题。

发明内容

本发明的目的是要解决现有红松在进行体细胞胚胎发生时，体胚萌发困难，萌发率低的问题，提供一种低温处理提高红松体胚萌发率的方法。

本发明一种低温处理提高红松体胚萌发率的方法按以下步骤进行：

一、胚性愈伤诱导

采集红松的未成熟球果，取出未成熟种子后消毒，剥去种皮，用双氧水处理6-10min，无菌水冲洗3～5次后，得到灭菌后的种仁，然后接种在诱导培养基上，在24±1℃条件下暗培养两个月，即得到胚性愈伤组织；

二、胚性愈伤增殖

将胚性愈伤接增殖培养基A上，在23～25℃的条件下，暗培养14d，得到增殖的胚性细胞团；

三、体胚成熟培养

将增殖的胚性细胞团，置于灭菌离心管中，然后加入增殖培养基B，剧烈震荡，胚性细胞团分散形成悬浮液；将灭菌的滤纸置于灭菌的布氏漏斗上，用移液枪吸取悬浮液，均匀平铺于滤纸上，吸干滤纸上液体，将滤纸置于成熟培养基上，在23～25℃的条件下，暗培养40～60d，得到体胚；

四、体胚萌发

将发育正常的体胚置于空气相对湿度为90％-98％、4℃条件下暗培养7d，然后将体胚取出转移至萌发培养基中进行萌发，即完成。

本发明通过低温处理的方法打破体胚的春化现象从而显著提高体胚萌发率，在4℃条件下干燥培养一周有利于体胚的萌发，通过试验发现，4℃条件下干燥培养1周的体胚萌发率高达88.33％。

附图说明

图1为成熟子叶型体胚；

图2为体胚春化处理；

图3为体胚萌发生根俯视图；

图4为体胚萌发生根主视图；

图5为红松再生植株。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式一种低温处理提高红松体胚萌发率的方法按以下步骤进行：

一、胚性愈伤诱导