[发明专利]核酸提取用乳化剂、含有该乳化剂的裂解结合液和核酸提取试剂盒及其应用

说明书

本申请公开了一种核酸提取用乳化剂、含有该乳化剂的裂解结合液和核酸提取试剂盒及其应用。该乳化剂包括吐温‑20、TritonX‑100与十二烷基二甲基甜菜碱核酸提取用乳化剂，裂解结合液包括该乳化剂及离液盐、蛋白质变性剂、螯合剂、缓冲剂与醇类。本申请提供的乳化剂可有效溶解样本例如血浆中的油脂，降低其对cfDNA的影响，含有该乳化剂的裂解结合液能够有效去除蛋白质，提供高盐环境以利于核酸结合到磁珠上，并且对各种类型的血浆样品尤其是油脂较高的样品具有良好的提取效率。

技术领域

本申请涉及生物医学领域，具体涉及核酸提取用乳化剂、含有该乳化剂的裂解结合液和核酸提取试剂盒及其应用。

背景技术

1948年，科学家首次发现在人类的血液循环中存在着循环核酸(cfDNA,circulating free DNA)，即游离于细胞外的DNA。cfDNA主要由部分降解的机体内源性DNA组成，是高度碎片化的DNA片段的混合体。在健康人的血浆中，cfDNA来自于凋亡细胞，而癌症病人血浆中的cfDNA除来自于凋亡细胞外，还来自于肿瘤细胞主动释放出的DNA及肿瘤细胞坏死溶解释放出的DNA。人体胚胎的cfDNA能够通过胎盘组织脱落的凋亡细胞进入母体的血液循环，因此在孕妇的外周血中也存在着一定比例的胎儿游离DNA(cell free fetalDNA，cffDNA)。目前，cfDNA在胎儿无创产前诊断、肿瘤的早期诊断与预后、感染性疾病检测和治疗领域具有广泛的应用前景。基于胎儿游离DNA和肿瘤游离DNA(cell free tumorDNA，ctDNA)的无创产前筛查和肿瘤液体活检技术在临床中应用日益广泛，且发展极其迅速。

cfDNA具有含量少、半衰期短的特点，使其在提取过程中容易丢失，提取难度大，且血液中含有的一些成分如油脂、蛋白质等会进一步降低提取效率。目前提取cfDNA最常用的方法主要有传统的酚-氯仿-异戊醇法，硅胶膜吸附柱法，酚-氯仿-异戊醇法提取效率较低且要用到有毒的有机试剂，硅胶膜吸附柱法需要反复离心，极大地降低了检测通量，且硅胶柱法回收率较低，不太适合用于小片段的提取。

发明内容

为了改善上述问题，本申请提供了一种核酸提取用乳化剂、含有该乳化剂的裂解结合液和核酸提取试剂盒及其应用，该核酸提取用乳化剂可以有效地溶解血浆中的油脂，降低其对cfDNA提取的影响。本申请提供一种核酸提取用乳化剂，包括吐温-20、TritonX-100和十二烷基二甲基甜菜碱，所述吐温-20、TritonX-100和十二烷基二甲基甜菜碱的体积比为(1-15):(0.2-5):1。

本申请还提供一种核酸提取用裂解结合液，包括离液盐、第一蛋白质变性剂、螯合剂、缓冲剂、乳化剂和醇类，所述乳化剂包括吐温-20、TritonX-100与十二烷基二甲基甜菜碱。

根据本申请，所述乳化剂中吐温-20、TritonX-100和十二烷基二甲基甜菜碱的体积比为(1-15):(0.2-5):1

根据本申请，以所述裂解结合液的总体积计，所述乳化剂的体积百分比为7％-25％。

根据本申请，以所述裂解结合液的总体积计，吐温-20的体积百分比为5％-15％，TritonX-100的体积百分比为1％-5％，十二烷基二甲基甜菜碱的体积百分比为1％-5％。

根据本申请，所述离液盐为碘化钠、氯化锂和高氯酸钠中的一种或多种；所述第一蛋白质变性剂为SDS、盐酸胍和异硫氰酸胍的一种或多种；所述螯合剂为EDTA或其钠盐，或柠檬酸钠；所述缓冲剂为Tris-HCl；所述醇类为异丙醇或无水乙醇。

根据本申请，以所述裂解结合液的总体积计，所述离液盐的摩尔浓度为3mol/L-6mol/L；所述第一蛋白质变性剂中SDS的浓度为30-70mmol/L，盐酸胍和/或异硫氰酸胍的浓度为2mol/L-6mol/L；所述螯合剂的摩尔浓度为5-20mmol/L；所述缓冲剂的摩尔浓度为20-100mmol/L；所述醇类的体积分数为20％-50％。