[发明专利]一种高对比明显度的干细胞体外稳定性的检测方法

权利要求书

1.一种高对比明显度的干细胞体外稳定性的检测方法，其特征在于，至少包括以下步骤：

(1)配制琼脂培养基；

(2)将人间充质干细胞、人宫颈癌细胞和人胚肺成纤维细胞接种于琼脂培养基中进行培养，并设置空白对照组，连续培养21天后于显微镜下，观察人间充质干细胞、人宫颈癌细胞和人胚肺成纤维细胞的集落状况，从而判定细胞的体外成瘤状况。

2.根据权利要求1所述的高对比明显度的干细胞体外稳定性的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中观察人间充质干细胞、人宫颈癌细胞和人胚肺成纤维细胞的集落状况时，以50μm作为判断标准，＜50μm为非集落细胞，≥50μm且大于16个细胞为集落细胞，存在集落细胞认定为存在体外成瘤的可能性。

3.根据权利要求1所述的高对比明显度的干细胞体外稳定性的检测方法，其特征在于，所述琼脂培养基包括不相融合的底层琼脂培养基和上层琼脂培养基。

4.根据权利要求3所述的高对比明显度的干细胞体外稳定性的检测方法，其特征在于，所述底层琼脂培养基的制备原料包括1％(M/V)的琼脂溶液、DMEM培养基和RPMI1640培养基，所述琼脂溶液、DMEM培养基和RPMI1640培养基之间的体积比为：3:3(1-3)。

5.根据权利要求3所述的高对比明显度的干细胞体外稳定性的检测方法，其特征在于，所述上层琼脂培养基的制备原料包括0.7％(M/V)的琼脂溶液、DMEM培养基和RPMI1640培养基，所述琼脂溶液、DMEM培养基和RPMI1640培养基之间的体积比为：3:3(1-3)。

6.根据权利要求4或5中所述的高对比明显度的干细胞体外稳定性的检测方法，其特征在于，所述1％(M/V)的琼脂溶液和0.7％(M/V)的琼脂溶液均在121℃下，经过30-60min的灭菌。

7.根据权利要求6所述的高对比明显度的干细胞体外稳定性的检测方法，其特征在于，所述DMEM培养基为高糖培养基。

8.根据权利要求6所述的高对比明显度的干细胞体外稳定性的检测方法，其特征在于，所述RPMI1640培养基中的胎牛血清浓度为10-15％wt。

9.根据权利要求1所述的高对比明显度的干细胞体外稳定性的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中的将人间充质干细胞、人宫颈癌细胞和人胚肺成纤维细胞放置于琼脂培养基中进行培养，并设置空白对照组的具体操作方法至少包括以下步骤：

(1)取底层琼脂培养基分别加入4个6孔板中，2-3ml/孔，静置使其凝固备用；

(2)将人间充质干细胞、人宫颈癌细胞和人胚肺成纤维细胞分别接种于3个凝固有底层琼脂培养基的6孔板中；

(3)取上层琼脂培养基分别加入上述6孔板中，2-3ml/孔，其中未接种细胞的作为对照组。

10.根据权利要求9所述的高对比明显度的干细胞体外稳定性的检测方法，其特征在于，所述人间充质干细胞、人宫颈癌细胞和人胚肺成纤维细胞的接种浓度为：1.5*10³/2ml-2.5*10³/2ml。