[发明专利]一种松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽的制备方法

权利要求书

1.一种松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽的制备方法，包括松茸蛋白粉的提取和水解松茸蛋白粉，其特征在于：所述松茸蛋白粉的提取是将松茸子实体预处理后，溶解在pH为9.5的碱溶液中，进行超声提取，最后调节pH至8.7~9.2，在72~76℃下进行碱提取1.3~1.6h，离心取上清液进行盐析，再进行透析和冷冻干燥。

2.如权利要求1所述的一种松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽的制备方法，其特征在于：所述超声是在功率为200~250W下进行超声处理15~20min。

3.如权利要求1或2所述的一种松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽的制备方法，其特征在于：所述盐析是在所述上清液中加入饱和度为90%的硫酸铵，在4℃下静置盐析12~24h，盐析后的溶液得沉淀物，所述透析是用PBS磷酸盐缓冲液溶解沉淀物，得松茸粗蛋白溶液，将松茸粗蛋白溶液在10kDa透析袋中进行透析除盐，4℃下静置24h，收集透析袋中溶液即为松茸蛋白溶液。

4.如权利要求1-3任一项所述的一种松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽的制备方法，其特征在于：所述水解松茸蛋白，具体是将所述松茸蛋白粉溶解在缓冲液中形成溶液，依次经过碱性蛋白酶和风味蛋白酶的酶解后离心、取上清液冷冻干燥，其中碱性蛋白酶的添加量为松茸蛋白粉质量的2%，酶解环境是pH为9.5，温度为50℃，酶解2h，风味蛋白酶的添加量为松茸蛋白粉质量的2%，酶解环境的pH为7，酶解温度为50℃，酶解时间为2h。

5.一种松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽的制备方法，其特征在于，按如下步骤进行：

步骤一、松茸蛋白的提取

（1）将松茸子实体在60℃下烘干，粉碎后过60目筛后，溶解在pH为9.5的碱溶液中，进行超声，超声功率为200~250W，超声时间为15~20min，最后调节pH至8.7~9.2，在72~76℃下进行碱提取1.3~1.6h，得蛋白提取液；

（2）向蛋白提取液中加入饱和度为90%的硫酸铵，在4℃下静置盐析12~24h，盐析后的溶液在10000rpm下离心20min得沉淀物，用PBS磷酸盐溶液溶解沉淀物，得松茸粗蛋白溶液；

（3）将松茸粗蛋白溶液在10kDa透析袋中，在4℃下静置24h，收集透析袋中的溶液，将溶液进行冻干，得松茸蛋白粉；

步骤二、水解松茸蛋白

将步骤1制备的松茸蛋白粉溶解在PBS磷酸盐缓冲溶液中，形成底物质量浓度为5%的溶液，调节溶液pH值为9.5，加入松茸蛋白粉质量2%的碱性蛋白酶，酶解温度为50℃，酶解2h，然后升温煮沸15min，调节溶液pH值至7，温度维持在50℃，加入松茸蛋白粉质量2%的风味蛋白酶，酶解2h，升温煮沸15min，在10000rpm下离心15min，取上清液冷冻干燥。