[发明专利]一种新的支原体鉴定方法在审
| 申请号： | 202110534325.8 | 申请日： | 2021-05-17 |
| 公开（公告）号： | CN113025694A | 公开（公告）日： | 2021-06-25 |
| 发明（设计）人： | 周斌 | 申请（专利权）人： | 上海轩锋生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12Q1/689;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200120 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 支原体 鉴定 方法 | ||
1.一种新的支原体鉴定方法，其特征在于：具体包括以下步骤，
步骤1、取细胞培养液上清2毫升,室温下500g离心5分钟；
步骤2、另取一只新的离心管，将步骤1离心后所得上清转移到新的离心管中；
步骤3、室温下12000g离心10分钟，弃去上清；
步骤4、将上述离心管在100℃温度下煮沸15分钟；
步骤5、取离心管中的液体2μl放入到新的试管中作为模板；
步骤6、在模版中加入上游引物和下游引物各0.5μl、2X PCR mix10μl和ddH2O 10μl，形成PCR体系；
步骤7、将PCR体系在94℃的温度下培养10min；
步骤8、依次在94℃的温度下培养10min，在55℃的温度下培养30s，在72℃的温度下培养30s；
步骤9、按照步骤8培养34个循环后，在72℃的温度下培养60s；
步骤10、取1ul培养后的PCR体系样本液体使用Qubit4.0检测扩增结果。
2.根据权利要求1所述的一种新的支原体鉴定方法，其特征在于：所述上游引物为5'-TGC ACC ATC TGT CAC TCT GTT AAC CTC-3'。
3.根据权利要求1所述的一种新的支原体鉴定方法，其特征在于：所述下游引物为5'-GGGAGCAAA CAG GAT TAGATACCCT-3'。
4.根据权利要求1所述的一种新的支原体鉴定方法，其特征在于：所述步骤1-步骤10须在II级生物安全柜内操作，并严格遵守无菌操作。
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