[发明专利]一种毒死蜱、多菌灵、阿特拉津三合一检测方法

权利要求书

1.一种毒死蜱、多菌灵、阿特拉津三合一检测方法，其特征在于，包括步骤：

提供SPR芯片，所述SPR芯片上设置有至少三个流道，每个流道内均偶联有蛋白捕获抗原；

将不同浓度的毒死蜱标准样品分别与固定浓度的毒死蜱单克隆抗体混合，得到不同浓度的毒死蜱混合样品；将不同浓度的多菌灵标准样品分别与固定浓度的多菌灵单克隆抗体混合，得到不同浓度的多菌灵混合样品；将不同浓度的阿特拉津标准样品分别与固定浓度的阿特拉津单克隆抗体混合，得到不同浓度的阿特拉津混合样品；

将所述不同浓度的毒死蜱混合样品、不同浓度的多菌灵混合样品以及不同浓度的阿特拉津混合样品分别通过所述SPR芯片，测得不同浓度的毒死蜱混合样品对应的RU值，不同浓度的多菌灵混合样品对应的RU值，以及不同浓度的阿特拉津混合样品对应的RU值；

根据不同浓度的毒死蜱混合样品对应的RU值，不同浓度的多菌灵混合样品对应的RU值，以及不同浓度的阿特拉津混合样品对应的RU值分别构建毒死蜱浓度-RU标准曲线、多菌灵浓度-RU标准曲线、阿特拉津浓度-RU标准曲线；

将待测样品分别与所述固定浓度的毒死蜱单克隆抗体、固定浓度的多菌灵单克隆抗体以及固定浓度的阿特拉津单克隆抗体混合，分别得到第一待测混合样品、第二待测混合样品以及第三待测混合样品；

将所述第一待测混合样品、第二待测混合样品以及第三待测混合样品分别通过所述SPR芯片上的三个流道，测得对应的第一RU值、第二RU值、以及第三RU值；

根据所述第一RU值以及所述毒死蜱浓度-RU标准曲线获得待测样品中的毒死蜱浓度，根据所述第二RU值以及所述多菌灵浓度-RU标准曲线获得待测样品中的多菌灵浓度，根据所述第三RU值以及所述阿特拉津浓度-RU标准曲线获得待测样品中的阿特拉津浓度；

其中，所述SPR芯片的制备包括步骤：

将镀金芯片放入表面皿中，纯水淋洗3次；然后缓慢加入98％H₂SO₄:30％H₂O₂混合液，80℃条件下孵育5分钟，所述98％H₂SO₄:30％H₂O₂混合液的体积比为7:3；

然后将镀金芯片浸入16-巯基-1-十一烷酸溶液中，孵育预定时间后，使16-巯基-1-十一烷酸结合在镀金芯片上，得到修饰后镀金芯片；

将EDC与NHS的混合液流经所述修饰后镀金芯片表面，得到活化后镀金芯片；

将蛋白捕获抗原溶液流经所述活化后镀金芯片表面各自的流道区域，使所述蛋白捕获抗原偶联在所述活化后镀金芯片的流道上，制得所述SPR芯片。

2.根据权利要求1所述的毒死蜱、多菌灵、阿特拉津三合一检测方法，其特征在于，将镀金芯片浸入16-巯基-1-十一烷酸溶液中，孵育预定时间后，使16-巯基-1-十一烷酸结合在镀金芯片上，得到修饰后镀金芯片的步骤包括：

将16-巯基-1-十一烷酸分散在无水乙醇中，得到16-巯基-1-十一烷酸溶液；

将镀金芯片浸入在所述16-巯基-1-十一烷酸溶液中，放入恒温摇床中，调节温度为30-40℃，转速为80-120rpm，孵育7-9小时，使16-巯基-1-十一烷酸结合在镀金芯片上；

孵育结束后，用无水乙醇和纯化水对所述镀金芯片进行清洗，氮气吹干后，制得所述修饰后镀金芯片。

3.根据权利要求1所述的毒死蜱、多菌灵、阿特拉津三合一检测方法，其特征在于，将EDC与NHS的混合液流经所述修饰后镀金芯片表面，得到活化后镀金芯片的步骤包括：

将200mM的所述EDC与200mM的NHS按照1:1的体积混合，得到混合液；

将200μL的所述混合液以20μL·min^-1的速度流经所述修饰后镀金芯片表面；

运行结束后再以100μL·min^-1的速度通入纯水溶液进行冲洗至基线稳定，制得所述活化后镀金芯片。