[发明专利]一种毒死蜱、多菌灵、阿特拉津三合一检测方法

说明书

本发明公开了一种毒死蜱、多菌灵、阿特拉津三合一检测方法，其包括步骤：首先将农药小分子的牛血清偶联蛋白捕获抗原共价偶联到镀金芯片表面，构建SPR芯片；然后选择合适固定浓度的单克隆抗体，混合不同浓度的农药残留提取物标样；农药残留的标样预先与其对应的单克隆抗体结合；反应剩余的单克隆抗体再次结合到SPR芯片表面，当农药的残留浓度越高，与SPR芯片表面的蛋白捕获抗原结合的单克隆抗体越少，响应信号越低，响应值与浓度存在反比关系，从而实现对农药残留的定量检测。本发明提供的的检测方法不需要对待测样本进行复杂的预处理，且本发明能够同时实现定量检测毒死蜱、多菌灵、阿特拉津三种农药的残留浓度，其检测效率高。

技术领域

本发明涉及农药残留检测领域，尤其涉及一种毒死蜱、多菌灵、阿特拉津三合一检测方法。

背景技术

毒死蜱的化学名为O,O-二乙基-O-(3,5,6-三氯-2-吡啶基)硫代磷酸，分子式为C₉H₁₁Cl₃NO₃PS，呈白色结晶，具有轻微的硫醇味，是一种非内吸性广谱杀虫、杀螨剂，在土地中挥发性较高。多菌灵(Carbendazim)为苯并咪唑类杀菌剂，是一种良好的广谱、内吸性杀菌剂，对子囊菌、担子菌以及半知菌类中的大多数病原菌都有效，广泛应用于农作物、中草药、烟草等的病害防治工作中。阿特拉津的化学名称为2-氯-4-乙胺基-6-异丙胺基-1,3,5-三嗪，分子式为C₈H₁₄ClN₅，是一种三嗪类除草剂。

毒死蜱、多菌灵以及阿特拉津这三种药物均可用于农作物病害防治工作中，但是这些药物能被植物的种子、根和叶吸收，残效期较长，对人、畜均有一定毒性。例如，我国针对不同作物，制定了多菌灵的最大残留限量标准，其中，多菌灵在谷物中的最大残留限量在0.05-2mg/kg之间，在蔬菜中的最大残留限量在0.02-5mg/kg之间，在水果中的最大残留限量在0.5-5mg/kg之间，在坚果中的最大残留限量为0.1mg/kg。

目前，国内外对毒死蜱、多菌灵、阿特拉津等残留的检测方法主要有高效液相色谱-质谱联用法、高效液相色谱法。仪器方法具备检测灵敏度高、特异性强等优势，但是检测样本前处理繁琐、耗时，样品还需提取和净化处理，同时仪器检测方法需要昂贵的大型仪器和设备，配备专业的检测技术人员进行操作和管理，无法进行现场大规模检测，时效性差，难以推广。

因此，现有技术还有待于改进和发展。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种毒死蜱、多菌灵、阿特拉津三合一检测方法，旨在解决现有技术对毒死蜱、多菌灵、阿特拉津的检测存在检测效率较低、样品处理繁琐的问题。

本发明的技术方案如下：

一种毒死蜱、多菌灵、阿特拉津三合一检测方法，其中，包括步骤：

提供SPR芯片，所述SPR芯片上设置有至少三个流道，每个流道内均偶联有蛋白捕获抗原；

将不同浓度的毒死蜱标准样品分别与固定浓度的毒死蜱单克隆抗体混合，得到不同浓度的毒死蜱混合样品；将不同浓度的多菌灵标准样品分别与固定浓度的多菌灵单克隆抗体混合，得到不同浓度的多菌灵混合样品；将不同浓度的阿特拉津标准样品分别与固定浓度的阿特拉津单克隆抗体混合，得到不同浓度的阿特拉津混合样品；

将所述不同浓度的毒死蜱混合样品、不同浓度的多菌灵混合样品以及不同浓度的阿特拉津混合样品分别通过所述SPR芯片，测得不同浓度的毒死蜱混合样品对应的RU值，不同浓度的多菌灵混合样品对应的RU值，以及不同浓度的阿特拉津混合样品对应的RU值；

根据不同浓度的毒死蜱混合样品对应的RU值，不同浓度的多菌灵混合样品对应的RU值，以及不同浓度的阿特拉津混合样品对应的RU值分别构建毒死蜱浓度-RU标准曲线、多菌灵浓度-RU标准曲线、阿特拉津浓度-RU标准曲线；