[发明专利]一种适用于无花果实生苗的性别鉴定方法

权利要求书

1.一种适用于无花果实生苗的性别鉴定方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）取新鲜的无花果组织材料，放入液氮中迅速冷却，然后取适量材料丢入研钵中快速研磨成粉末，取30mg植物组织粉末置于2mL的离心管中，丢入液氮中备用；

（2）对无花果组织进行DNA的提取，DNA的提取方法采用CTAB法或采用植物组织DNA提取试剂盒提取；

（3）按照PCR酶说明书配置反应体系，扩增模板选择步骤（2）中提取的无花果组织DNA，扩增引物为雄性特异性引物AG-Maker：

正向引物序列AG-Maker-F：5’-CAGGAGGAGGAAGCT-3’；

反向引物序列AG-Maker-R：5’-TTACACTAATTGGAGGGCCA-3’；

（4）继续按照PCR酶说明书中的扩增程序将已配好的反应体系置于基因扩增仪中进行PCR扩增；

（5）取PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳；

（6）取胶块于凝胶成像仪中观察是否存在目的条带，雄性特异性条带的长度为146bp，如果目的条带存在则证明该无花果植株为雄树，反之则为雌树；

步骤（1）中，无花果组织材料为无花果幼苗的根、茎或叶片或者为无花果树的根、茎、叶、花蕊或果皮；将装有无花果组织材料的离心管放置于-80℃的冰箱中长期储存备用；

步骤（2）中，采用试剂盒提取时按照植物组织DNA提取试剂盒说明书上的步骤完成对无花果组织DNA的提取；

步骤（4）中，PCR扩增过程中熔解温度设置为55℃，根据PCR酶的扩增速度和效率设置延伸时间和循环数；

步骤（5）中，琼脂糖凝胶电泳过程电泳仪设定为140V，15～20分钟。