[发明专利]一种含谷氨酸脱羧酶全细胞的工业化发酵生产方法

权利要求书

1.一种含谷氨酸脱羧酶全细胞的工业化发酵生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

构建或选育遗传稳定性表达谷氨酸脱羧酶的工程菌；将所得工程菌进行种子液培养，获得一级、二级种子液；培养得到的二级种子液按3％的接种量接入到1000L发酵培养基中，温度控制在37℃，搅拌转速为200rpm，通气量为1.5vvm，发酵至OD₆₀₀为12.3时，发酵时间6h加入终浓度为0.45mmol/L的IPTG，开始在30℃下诱导；发酵进行至4.8h时溶氧开始回升，开始流加浓度为50％的甘油，整个发酵过程共流加18.5％v/v的甘油，最大流加速率为24.5mL/(L·h)；从发酵2.5h开始流加浓度为26％的氨水，整个发酵过程共流加氨水6.5％v/v，最大流加速率为2.5mL/(L·h)；

所述发酵培养基为：玉米浆23g/L、蛋白胨15g/L、酵母粉12g/L、氯化钠5g/L、硫酸镁1g/L、氯化钙0.3g/L、硫酸亚铁0.3g/L、L-谷氨酸钠3g/L、甘油10g/L、氯化铵2g/L、尿素2g/L、磷酸氢二钾7g/L、磷酸二氢钾1.4g/L，pH7.0；

所述工程菌以E.coli BL21(DE3)为宿主，以pET28a(+)为载体，重组表达谷氨酸脱羧酶GadB基因，所述基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。