[发明专利]一种华支睾吸虫特异抗原VAL28及医用用途

权利要求书

1.一种华支睾吸虫特异抗原基因VAL28，其基因序列如：SEQ No.1所示。

2.如权利要求1所述的一种华支睾吸虫特异抗原基因VAL28的获取方法：包括以下步骤：

根据华支睾吸虫VAL28的基因序列，设计特异性引物序列如下：

F:CGCGGATCCTTTGTGAAGCTGCATGATC；

R:CCCAAG CTTCTTCAAGTGGCCTGGAC；

通过聚合酶链式反应扩增出华支睾吸虫VAL28的目的片段；

利用BamHI和HindIII两种酶对重组质粒pMD-18T-VAL28进行双酶切鉴定，通过1%琼脂糖凝胶电泳分离、鉴定，构建pMD-18T-VAL28克隆载体；

利用BamHI和HindIII两种酶对重组质粒pET-28a-VAL28进行双酶切鉴定，通过1%琼脂糖凝胶电泳分离、鉴定，构建pET-28a-VAL28表达载体；

将pET-28a菌液和测序成功的重组表达载体pET-28a-VAL28菌液分别培养于LB培养基，待其生长至OD600=0.6时，加入千分之一的IPTG诱导5h，完成表达并进行纯化，然后经SDS-PAGE分析完成蛋白的鉴定。

3.利用权利要求1所述的华支睾吸虫特异抗原基因VAL28制备的一种检测华支睾吸虫感染的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于：

通过对华支睾吸虫VAL28进行蛋白纯化，利用柠檬酸三钠还原法烧制胶体金溶液，然后对胶体金溶液的pH及SPA蛋白的标记量等条件进行确定，将样品垫、硝酸纤维素膜（NC膜）、金标垫、PVC底板、吸水纸等进行组装，对组装好的试纸条的检测线（华支睾吸虫VAL28蛋白）和质控线（兔抗SPA蛋白）的最佳包被量进行确定，即得。