[发明专利]一种华支睾吸虫特异抗原VAL28及医用用途

说明书

发明涉及一种华支睾吸虫特异抗原基因VAL28及医用用途，为一种新的基因蛋白；基于华支睾吸虫VAL28蛋白制备的胶体金试纸条具有稳定性高、特异性强、灵敏性好，检测成本低廉等优势，另外试纸条使用方便、操作简单、检测结果简单明了、适于临床中快速诊断，解决了临床上检测和诊断疾病时间紧、待检样品数量大等问题，同时好的检测方法可以在一定程度上降低华支睾吸虫病带来的疾病负担。

技术领域

本发明涉及一种华支睾吸虫特异抗原基因VAL28，以及基于VAL28为抗原研制检测华支睾吸虫感染的胶体金免疫层析试纸，可用于华支睾吸虫感染的血清检测，属于免 疫学技术领域。

背景技术

华支睾吸虫病又称肝吸虫病，是由华支睾吸虫（Clonorchis sinensis）寄生在包括人在内的哺乳类动物的肝胆管内所引起的以肝胆病变为主的一种重要的食源性人兽共患寄生虫病。华支睾吸虫的流行区与病毒性肝炎流行区重叠，对全球公共卫生安全产生重大威胁。华支睾吸虫感染者患肝胆管癌的风险是正常人的4.5倍，患肝硬化、肝癌的风险也成倍的增加。因此对华支睾吸虫感染血清进行血清学检测和流行病学调查可以有效的降低华支睾吸虫病的风险，有利于减轻华支睾吸虫病造成的疾病负担，对人和动物的健康发展具有重要的意义。

目前用于华支睾吸虫病的诊断方法主要是粪便虫卵检查法，在显微镜下观察虫体形态特点来做出诊断。病原学诊断方法具有快速简便的优势，其也存在一定的弊端，如由于华支睾吸虫虫卵和后睾吸虫虫卵较为相似，所以对操作人员的经验和专业性要求较高，在轻度感染时易发生误检或漏检。免疫学诊断方法是病原学诊断方法的重要补充，其具有敏感性高、特异性强、重复性好并且适用于检测样品多的基层单位等优点而被广泛应用，是病原学诊断方法的重要补充。

VAL蛋白完全暴露于宿主的免疫系统中，对寄生虫和宿主之间的相互关系十分重要，被认为是潜在的良好抗原。本研究利用NCBI对华支睾吸虫VAL28基因序列进行比对分析，结果显示，华支睾吸虫VAL28基因序列与目前已上传基因库的其它寄生虫基因序列不存在同源性，初步表明该基因可能具有较好的特异性。目前未见关于基于华支睾吸虫VAL28为抗原制备免疫胶体金试纸条以检测华支睾吸虫感染的相关报道。

发明内容

本发明所述的一种华支睾吸虫特异抗原基因VAL28及医用用途，以及基于该基因为抗原制备的检测华支睾吸虫感染的胶体金免疫层析试纸，可用于华支睾吸虫感染血清的检测。

本发明所述的一种华支睾吸虫特异抗原基因VAL28（Clonorchis sinensis venomallergen-like protein 28，简称：CSVAL28）（GenBank: MH172541.1），其基因序列如：SEQNo.1所示。

本发明所扩增的华支睾吸虫特异抗原基因VAL28目的片段大小为495bp，此目的片段已去掉信号肽。通过SMART在线软件分析该基因表达的蛋白含有SCP结构域，通过ExPASy的ProtParam数据库对该蛋白的理化性质进行预测，该蛋白含有165个氨基酸，等电点为8.80。

本发明所述的一种华支睾吸虫特异抗原基因VAL28的获取方法，包括以下步骤：

根据华支睾吸虫VAL28的基因序列，设计特异性引物，通过聚合酶链式反应扩增出华支睾吸虫VAL28的目的片段，获得华支睾吸虫特异性抗原基因VAL28。

本发明所述的基于华支睾吸虫VAL28蛋白制备的一种检测华支睾吸虫感染的胶体金免疫层析试纸条：通过对华支睾吸虫VAL28进行蛋白纯化，利用柠檬酸三钠还原法烧制胶体金溶液，然后对胶体金溶液的pH及SPA蛋白的标记量等条件进行确定，将样品垫、硝酸纤维素膜（NC膜）、金标垫、PVC底板、吸水纸等进行组装，对组装好的试纸条的检测线（华支睾吸虫VAL28蛋白）和质控线（兔抗SPA蛋白）的最佳包被量进行确定，制备了一种诊断和检测华支睾吸虫感染的胶体金试纸条。

本发明积极效果在于：