[发明专利]一种松茸的真伪鉴别方法

说明书

本发明属于食药用真菌鉴定技术领域，具体涉及一种松茸的真伪鉴别方法。主要解决目前尚无快速鉴别松茸及混淆品方法的技术问题。本发明采用的技术方案是：一种松茸的真伪鉴别方法，其通过PCR扩增松茸特异的DNA片段鉴别松茸的真伪，包括以下步骤：(1)提取待测松茸样品的基因组DNA；(2)从提取的所述基因组DNA中，获取松茸特异的DNA片段线粒体基因组序列，并根据线粒体基因组序列设计出进行PCR扩增的特异引物；(3)用所述特异引物进行PCR扩增；(4)对所述PCR扩增的产物进行凝胶电泳检测；(5)鉴别真伪松茸。本发明可以快速、准确、灵敏地检测松茸特异性的DNA，为珍稀食药用真菌的质量控制提供了简单快速有效的方法。

技术领域

本发明属于食药用真菌鉴定技术领域，具体涉及一种松茸的真伪鉴别方法。

背景技术

松茸(Tricholoma matsutake)是担子菌门口蘑科的一种外生菌根真菌，具有良好的生物活性和药用价值，如抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、提高机体免疫力等，是世界上珍贵的天然野生食药用菌，被誉为“蘑菇之王”。野生松茸主要分布在包括日本、中国和韩国在内的东亚国家，以及包括挪威、芬兰和瑞典在内的北欧国家。由于松茸的生长需要独特的环境和气候条件，以及需要适宜的共生植物，目前尚未实现全人工规模化栽培，属于国家二级濒危保护物种。不幸的是，由于环境的恶化和大规模掠夺式的采收，野生松茸资源日渐枯竭，全球松茸产量逐年递减，导致其市场价格不断攀升。在松茸市场上，充斥着一些与松茸具有相似子实体形态的物种。它们被冠以带松茸字眼的名称(如姬松茸、赤松茸等)，或者被销售者直接简称为松茸，但它们其实跟真正的松茸没有任何关系，代表完全不同的物种。这种状况给消费者造成很大的误解和困扰，而市场上目前尚无快速鉴别松茸及混淆品的方法。

发明内容

本发明的目的是解决目前尚无快速鉴别松茸及混淆品方法的技术问题，提供一种松茸的真伪鉴别方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：

一种松茸的真伪鉴别方法，其通过PCR扩增松茸特异的DNA片段鉴别松茸的真伪，包括以下步骤：

(1)提取待测松茸样品的基因组DNA；

(2)从提取的所述基因组DNA中，获取松茸特异的DNA片段线粒体基因组序列，并根据线粒体基因组序列设计出进行PCR扩增的特异引物；

(3)用所述特异引物进行PCR扩增；

(4)对所述PCR扩增的产物进行凝胶电泳检测；

(5)鉴别真伪松茸，将所述凝胶电泳检测的凝胶放到凝胶成像仪中进行观察，若电泳结果出现符合预期的条带，鉴别为松茸样品；若电泳结果未出现符合预期的条带，鉴别为混淆品或电泳结果未出现任何条带，同样鉴别为混淆品。

进一步地，所述松茸特异的DNA片段为松茸线粒体DNA中的一段序列，即cox1P372、cox1P386或nad5P417片段。

进一步地，所述cox1P372片段的PCR扩增反应的上游引物为cox1P372-F1：5′-ACATTAATACGCTAGGCTCCAAT-3′，下游引物为cox1P372-R1：5′-TCTCGTATTCTAAAGTGAGCATGA-3′。

进一步地，所述cox1P386片段的PCR扩增反应的上游引物为cox1P386-F1：5′-TCAGAGACTTAACGTAGAGCATC-3′，下游引物为cox1P386-R1：5′-TCTTTCGCATTTGTTGACGTATT-3′。

进一步地，所述nad5P417片段的PCR扩增反应的上游引物为nad5P417-F1：5′-TCCCGGCCTAAGTGTAATGT-3′，下游引物为nad5P417-R1：5′-ACAACTATTCCTCCATCATCCTT-3′。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：