[发明专利]一种具有转糖基活性的α-半乳糖苷酶及克隆表达在审
| 申请号： | 202110547765.7 | 申请日： | 2021-05-19 |
| 公开（公告）号： | CN113151221A | 公开（公告）日： | 2021-07-23 |
| 发明（设计）人： | 蓝莹儿;费永涛;刘功良;李理;白卫东 | 申请（专利权）人： | 仲恺农业工程学院 |
| 主分类号： | C12N9/40 | 分类号： | C12N9/40;C12N15/56;C12N15/70;C12P19/14;C12P19/12;C12P19/00 |
| 代理公司： | 北京中政联科专利代理事务所(普通合伙) 11489 | 代理人： | 赖学能 |
| 地址： | 510225 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 具有 转糖基 活性 半乳糖 克隆 表达 | ||
1.一种具有转糖基活性的α-半乳糖苷酶的克隆表达，其特征在于，利用解淀粉乳杆菌L6获取α-半乳糖苷酶基因；
将所述α-半乳糖苷酶基因及表达载体进行酶切、连接以及转化；
将所述转化后的重组质粒进行筛选；
利用诱导剂将所述筛选后的重组质粒进行诱导表达。
2.根据权利要求1所述的具有转糖基活性的α-半乳糖苷酶的克隆表达，其特征在于，所述利用解淀粉乳杆菌获取α-半乳糖苷酶基因包括：
提取解淀粉乳杆菌L6中的α-半乳糖苷酶基因组DNA；
以所述α-半乳糖苷酶基因组DNA为模板，以GLA-F和GLA-R作为引物，利用PCR扩增α-半乳糖苷酶DNA序列。
3.根据权利要求2所述的具有转糖基活性的α-半乳糖苷酶的克隆表达，其特征在于，所述利用PCR扩增α-半乳糖苷酶DNA序列的反应程序包括：
98℃预变性30s；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸2.5min，扩增30个循环，72℃总延伸10min。
4.根据权利要求1所述的具有转糖基活性的α-半乳糖苷酶的克隆表达，其特征在于，所述连接中所述表达载体与所述α-半乳糖苷酶DNA的摩尔比为1.0:6.5。
5.根据权利要求1所述的具有转糖基活性的α-半乳糖苷酶的克隆表达，其特征在于，所述诱导α-半乳糖苷酶基因的表达后还包括：分离及纯化所述α-半乳糖苷酶；所述纯化方法为亲和层析。
6.一种具有转糖基活性α-半乳糖苷酶，其特征在于，由权利要求1-7任一项权利要求所述的方法制备。
7.根据权利要求6所述的α-半乳糖苷酶，其特征在于，所述α-半乳糖苷酶的最佳反应温度为37℃，最佳反应pH为5.0。
8.根据权利要求6所述的α-半乳糖苷酶，其特征在于，铜离子及锌离子对所述α-半乳糖苷酶具有抑制作用。
9.根据权利要求6所述的α-半乳糖苷酶，其特征在于，所述α-半乳糖苷酶具有转糖基活性并合成低聚糖的能力。
10.根据权利要求9所述的α-半乳糖苷酶，其特征在于，所述α-半乳糖苷酶能够利用蜜二糖合成低聚三糖、四糖及五糖。
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