[发明专利]一种调节猪早期胚胎发育的营养物质的高通量筛选细胞模型及其构建与应用

权利要求书

1.一种调节猪早期胚胎发育的营养物质的高通量筛选细胞模型，其特征在于，所述高通量筛选细胞模型的构建方法为：

(1)pGF-promoter载体构建：将猪PCNA基因启动子克隆至pGF-mCMV-EF1-Neo慢病毒载体中，获得pGF-promoter载体；

(2)转染HEK-293T细胞：将pGF-promoter载体和pMD2.g、psPAX2共转染HEK-293T细胞，孵育，收集慢病毒上清液；

(3)感染pTr细胞：用慢病毒感染pTr细胞；

(4)G418筛选稳转株：用G418筛选培养基培养pTr细胞，最终获得pTr-PCNA promoter-Luciferase稳转细胞株，其命名为pTr-luc；

所述猪PCNA基因启动子的序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的高通量筛选细胞模型，其特征在于，所述步骤(2)中pGF-promoter载体和pMD2.g、psPAX2的浓度比例为pGF-promoter：psPAX2：pMD2.g＝(2-5)：(2-3)：(1-2)。

3.根据权利要求2所述的高通量筛选细胞模型，其特征在于，所述pGF-promoter载体和pMD2.g、psPAX2的浓度比例为pGF-promoter：psPAX2：pMD2.g＝5：3：2。

4.根据权利要求1所述的高通量筛选细胞模型，其特征在于，所述pGF-promoter载体和pMD2.g、psPAX2共转染HEK-293T细胞采用的转染试剂为purefection。

5.根据权利要求1所述的高通量筛选细胞模型，其特征在于，所述步骤(4)中G418筛选培养基的筛选浓度为550μg/mL-700μg/mL。

6.根据权利要求5所述的高通量筛选细胞模型，其特征在于，所述步骤(4)中G418筛选培养基的筛选浓度为650μg/mL。

7.根据权利要求1所述的高通量筛选细胞模型，其特征在于，所述步骤(4)中G418筛选培养基培养pTr细胞的培养时间为3周-6周。

8.根据权利要求7所述的高通量筛选细胞模型，其特征在于，所述步骤(4)中G418筛选培养基培养pTr细胞的培养时间为4周。

9.根据权利要求1所述的高通量筛选细胞模型，其特征在于，所述高通量筛选细胞模型用于筛选出能够激活pTr细胞PCNA基因启动子的营养物质。

10.根据权利要求1所述的高通量筛选细胞模型，其特征在于，所述营养物质为白藜芦醇、芹菜素、维生素A棕榈酸酯、维生素B6、7-羟基黄酮、丹蒽醌和高良姜素。