[发明专利]一种从孕妇宫颈脱落细胞中分离胎盘滋养层细胞的方法

权利要求书

1.一种分离滋养层细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将宫颈脱落细胞液样本制备成样本细胞悬浮液；所述细胞悬浮液的最佳体系为含0.2%-0.4% FBS 的1×PBS；

(2)向样本细胞悬浮液中加入特异性抗体进行孵育；一抗孵育条件为：4℃反应30-90min；二抗-荧光标记复合物孵育条件为2℃-8℃反应20min；

所述特异性抗体是对应滋养层细胞表面或胞内表达的特异性抗原的抗体组合，即HLA-G+CK7、HLA-G+CK18、HLA-G+β-HCG、CD31+HPL、MMP9+CD31、HLA-G+HPL、HLA-G+MMP9、HLA-G+CD31、HLA-G+P、CD31+P、HLA-G+CDH5、CD31+CDH5、CD31+CK7+HLA-G、HLA-G+CK18+CD31、HLA-G+β-HCG+CD31、CD31+HPL+HLA-G、MMP9+CD31+HLA-G、CD31+P+HLA-G或HLA-G+CDH5+CD31的特异性抗体组合；

(3) 利用微流控分选芯片，将步骤(2)孵育完成的细胞重悬液进行荧光标记微流控细胞分选，获得分离纯化的胎盘滋养层细胞；

其中，细胞分选液相体系为0.2%-0.4% Triton-X-100；

所述微流控分选芯片包括基片和与之贴合的盖片；所述基片的一面上设有主流道、侧流道A和侧流道B，两个侧流道分别靠近主流道的左、右两端部；所述基片的另一面上设有C入口、S入口、N出口和T出口；四个口均贯穿到基片另一面与流道连通；且C入口的位置对应于主流道的左端部，S入口的位置对应于侧流道A端部，N出口的位置对应于主流道的右端部，T出口的位置对应于侧流道B端部；所述主流道内、在N出口与T出口汇合处，还设有偏转电极装置；

所有主流道、侧流道A和侧流道B的流道宽度均不超过1000μm，深度均不超过500μm。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)的具体方法是：通过孵育将一抗、二抗-荧光标记复合物先后分步与目标抗原进行特异性连接，中间使用洗涤和离心分离技术避免交叉污染。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)的具体方法是：孵育完成的细胞重悬液通入微流控分选芯片的C入口，并在S入口通入缓冲液；然后将微流控分选芯片放置于细胞分选仪并运行分选程序，程序结束后，搜集T出口的标本，获得分选的滋养层细胞。

4.权利要求1-3任一所述方法在构建人类STR鉴定的产品方面的应用。

5.权利要求1-3任一所述方法在构建人类染色体倍性检测的产品方面的应用。

6.权利要求1-3任一所述方法在构建地中海贫血基因检测的产品方面的应用。

7.权利要求1-3任一所述方法在构建耳聋基因检测的产品方面的应用。

8.权利要求1-3任一所述方法在构建全外显子组基因测序的产品方面的应用。

9.权利要求1-3任一所述方法在构建染色体微缺失/重复检测的产品方面的应用。

10.权利要求1-3任一所述方法在构建染色体结构变异检测的产品方面的应用。