[发明专利]一种用于检测水稻细菌性条斑病菌的引物对及检测方法有效
| 申请号： | 202110553869.9 | 申请日： | 2021-05-20 |
| 公开（公告）号： | CN113186315B | 公开（公告）日： | 2022-04-08 |
| 发明（设计）人： | 罗金燕;张健男;陈磊;张洁净;安千里;李斌 | 申请（专利权）人： | 上海市农业技术推广服务中心 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/64 |
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| 地址： | 201103 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 水稻 细菌性 病菌 引物 方法 | ||
1.一种用于检测水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola)的引物对，其特征在于，包括上游引物和下游引物，其核苷酸序列分别为：
上游引物：5'-ATCGAACGATGTCACCAGGG-3'；
下游引物：5'-AGAAACGTGCGGCCAGATAA-3'。
2.如权利要求1所述的引物对在检测水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzaepv.oryzicola)中的应用。
3.如权利要求1所述的引物对在制备用于检测水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonasoryzae pv.oryzicola)的试剂盒中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括SYBR Green I染料。
5.一种检测水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola)的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以待测样品的DNA作为扩增模板，采用如权利要求1所述的引物对，建立SYBR Green荧光定量PCR反应体系，进行荧光定量PCR扩增；
(2)根据Ct值和Tm值判定检测结果，若反应曲线呈“S”型，且Ct值≤36、Tm值介于87.5℃-88℃之间，则判定待测样品中含有水稻细菌性条斑病菌；若扩增曲线为一条直线，则判定待测样品中不含有水稻细菌性条斑病菌。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，待测样品为细菌、提取的细菌DNA或含有细菌/细菌DNA的粗提液。
7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，以每20μL计，荧光定量PCR反应体系组成为：2×ChamQ SYBR Master Mix 10μL，10μM的上、下游引物各0.4μL，基因组DNA1μL，无菌超纯水8.2μL。
8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，荧光定量PCR扩增程序为：1)95℃预变性30s；2)95℃10s、60℃30s，进行40个循环。
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