[发明专利]含有外泌体和胶原蛋白的治疗皮肤损伤的药物组合物

权利要求书

1.外泌体和胶原蛋白肽以及罗哌卡因在制备用于治疗免疫低下型皮肤损伤的药物中的用途；其中，所述外泌体的制备方法为将人表皮干细胞，加入含0.5％SEQ ID NO：1活性肽、10％FBS和1％双抗的DMEM/F12培养基中，置于37℃、5％CO₂培养箱中24h后，加入5mL培养基10％FBS和1％双抗的DMEM/F12培养基，每2.5d换液1次，至细胞汇合度达到85％时，用0.25％EDTA-胰酶消化，1∶3传代2次后，继续培养至干细胞汇合度达到65％时，弃去培养液，用PBS溶液小心清洗贴壁细胞3遍，加入含0.5％活性肽SEQ ID NO：1、10％胎牛血清和1％双抗的DMEM/F12溶液，置于35℃、1％CO₂培养箱中培养48h后收集细胞培养上清。将收集到的上清600g离心8min，2500g离心18min，10000g离心30min，液体用0.22μm无菌滤器过滤后，转移至超速离心管中，120000g离心90min，小心去除上清，用PBS重悬离心管底部沉淀后，加入PBS至充满离心管，120000g再次离心90min以清洗外泌体，小心去除上清液，冻干外泌体备用；

所述胶原蛋白肽的制备方法如下：将地图鱼皮切成0.3cm×0.3cm碎块，清洗，0.1mol/LNaOH溶液浸泡16h，水洗至中性，正己烷浸泡20h，去离子水冲洗干净。取适量处理后的鱼皮，加入6倍体积质量分数为0.2％的H₂SO₄以300r/min的转速搅拌40min，去离子水冲洗至中性，再加入6倍体积质量分数为1.0％的柠檬酸同一转速搅拌40min，去离子水冲洗至中性，最后加入10倍体积去离子水，45℃恒温水浴搅拌过夜，先用2层纱布过滤，再将滤液以6000r/min离心20min。上层清液中加入NaCl盐析48h，8000r/min离心15min，沉淀溶于0.5mol/L醋酸溶液中，0.1mol/L醋酸溶液透析24h，再用去离子水透析48h，每12h换一次透析液；透析结束后，采用冷冻干燥获得产物后进行酶解，酶解条件为在45温度/℃，pH值为8，加酶量2％，料液,1:25，提取时间4.5h后冷冻干燥即得到胶原蛋白肽。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述药物中，具体的用量为外泌体70mg/kg、胶原蛋白肽40mg/kg、罗哌卡因7.5mg/kg。

3.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述药物中还含有药学上可接受的载体。